[发明专利]一种绿风藤茶品种复壮的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种绿风藤茶品种复壮的组培快速繁殖方法，其步骤是：

A) 外植体的选取与灭菌：取绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖，经表面灭菌后备用，外植体的选取与灭菌为当年新萌发嫩枝的茎尖，剪掉嫩枝的叶片和卷须，切成长0.4-0.6cm带顶芽茎段，用洗洁精浸泡5~10 min后，刷洗干净，流水冲洗2-4h，移至超净工作台上，用70%体积比的酒精震荡清洗28-32S，无菌水洗2-4次，再放入质量与体积之比为0.1%的升汞溶液中震荡消毒6-8min，无菌水冲洗4-6次后，在解剖镜下切下0.4-0.6mm的茎尖，接种到初代培养基上；

B）将灭菌后的绿风藤茶幼嫩枝条的茎尖进行初代培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的外植体接种在初代培养基中，培养15~20d后，转接到诱导分化丛芽的培养基中；所述的初代培养基：WPM+6-BA1.5mg.L^-1+NAA0.2mg.L^-1+PVP2g.L^-1 +25g.L^-1蔗糖；或 MS+6-BA1.5 mg.L^-1+NAA0.2 mg.L^-1+ PVP2g.L^-1+25g.L^-1蔗糖；

C)增殖培养：在无菌条件下将丛芽切成单株接入增殖培养基中进行增殖培养，培养30~45天丛生芽可增殖出5~8倍；根据对幼苗数量，每隔30~45d按同样方法进行幼苗再增殖培养；诱导丛生芽和芽增殖的培养基：MS+TDZ0.2mg.L^-1+IAA0.1mg.L^-1+25g.L^-1蔗糖；

D)壮苗培养：初代培养和增殖培养过程中，将增殖培养的丛生芽转接到壮苗培养基中培养25~30d；所述的壮苗培养基：MS+6-BA1.0 mg.L^-1+NAA0.1 mg.L^-1+25g.L^-1蔗糖；

E) 生根培养：将壮苗培养的丛生苗切成单株后，接种在生根培养基中进行生根培养，培养20~30d后，幼苗基部长出3~8条根；所述的生根培养基：1/2MS+ PP₃₃₃0.2 mg.L^-1+IBA0.2mg.L^-1+20g.L^-1蔗糖；

F) 移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1~2个月至成苗，所述的移栽基质由草炭:蛭石按体积比1:3配制而成。

2.根据权利要求1所述的一种绿风藤茶品种复壮的组培快速繁殖方法，其特征在于：所述的初代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养的培养条件是，光照强度为40μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h.d^-1，其中初代培养的培养基pH6.0-6.5，培养温度为20~21℃，增殖培养、壮苗培养、生根培养培养阶段的培养温度为23-25℃，培养基pH为5.6-6。