[发明专利]一种高效分泌表达纳豆激酶的重组菌

权利要求书

1.纳豆激酶Pro-NK基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体是将两个以上的纳豆激酶Pro-NK基因插入真核表达载体后得到的。

2.根据权利要求1所述的纳豆激酶Pro-NK基因的重组载体，其特征在于，每个纳豆激酶Pro-NK基因处于一个与其相应的启动子之下表达。

3.根据权利要求2所述的纳豆激酶Pro-NK基因的重组载体，其特征在于，所述启动子为醇氧化酶I启动子或甲醛脱氢酶启动子。

4.根据权利要求3所述的纳豆激酶Pro-NK基因的重组载体，其特征在于，每个纳豆激酶Pro-NK基因处于一个与其相应的醇氧化酶I启动子之下表达，相邻的纳豆激酶Pro-NK基因之间依次串联有醇氧化酶I终止子、醇氧化酶I启动子与α-mating因子信号肽序列。

5.根据权利要求1所述的纳豆激酶Pro-NK基因的重组载体，其特征在于，所述真核表达载体为pAO815表达载体；所述pAO815表达载体是通过将pPICZα载体用SacI和EcoRI进行双酶切得到的1000bp片段与同样用SacI和EcoRI消化过的pAO815载体连接所得。

6.一种高效分泌表达纳豆激酶的重组菌，其同时含有两个拷贝以上纳豆激酶Pro-NK基因和Hac1p调控因子基因的重组巴斯德毕赤酵母菌（Pichia pastoris）。

7.根据权利要求6所述的高效分泌表达纳豆激酶的重组菌，其特征在于，所述纳豆激酶Pro-NK基因是通过权利要求1所述的重组载体导入到巴斯德毕赤酵母菌中。

8.根据权利要求6所述的高效分泌表达纳豆激酶的重组菌，其特征在于，所述Hac1p调控因子基因是通过组成型表达载体导入到有两个拷贝以上的纳豆激酶Pro-NK基因的重组巴斯德毕赤酵母菌中。

9.根据权利要求8所述的高效分泌表达纳豆激酶的重组菌，其特征在于，所述组成型表达载体为组成型表达载体pGAPZ-Hac1p，该组成型表达载体是通过将Hac1p调控因子基因插入到pGAPZA载体中构建而得。

10.根据权利要求6所述的高效分泌表达纳豆激酶的重组菌，其特征在于，所述Hac1p调控因子基因来源于酵母或霉菌。