[发明专利]靶向ADGB的抑制性RNA及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药及基因治疗领域，特别是设计靶向ADGB（Androglobin,ADGB）的抑制性多核苷酸及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

Androglobin（ADGB）是一种新发现的珠蛋白。ADGB的mRNA参考序列（genebank accession：NM_024694.3）有5300bp，是一个包含1667个氨基酸残基的蛋白。它包括一个calpain-7蛋白大亚基的催化结构域II样结构域、一个globin结构域、一个可供钙调蛋白结合的IQ样结构域。IQ样结构域位于globin结构域之内，把globin结构域分为了C-H段和A-B段两部分。虽然重组表达人ADGB的珠蛋白结构域表现出血红素铁原子的六配位的吸收光谱特性，但ADGB对组织缺氧并不敏感（David Hoogewijs等，Androglobin:A Chimeric Globin in Metazoans That Is Preferentially Expressed in Mammalian Testes，Molecular Biology and Evolution,2012,April,29(4):1105–1114）。

当前有关ADGB的研究报道极为有限，在肿瘤中的作用未见报道。

Small interfering RNA(siRNA)是一种小RNA分子（～21-25核苷酸），由Dicer（RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。

小发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）是一种形成急转弯结构的RNA序列，可以经由RNA干扰使基因沉默。

肿瘤是威胁人类健康的疾病之一，至今缺少理想的治疗手段和药物，开发新的药物迫在眉睫。基因治疗是非常有前景的，在不久的将来或许会成为肿瘤治疗的一个有效手段。RNA干扰技术是一种沉默基因表达的技术，两名美国科学家Andrew Z.Fire和Craig C.Mello因对此项技术的贡献于2006年被授予诺贝尔生理学奖。RNA干扰技术的原理是较长双链RNA被特异核酸酶Dicer切割加工成21-23nt的由正义和反义链组成的小干扰RNA。小干扰RNA随后形成沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)解旋成单链。反义链引导该沉默复合体通过碱基配对特异性结合到目标mRNA上，使mRNA分解。

胶质瘤是一种发生于脑或脊髓的肿瘤，最常发生部位为脑，因其来源神经胶质细胞而被称为胶质瘤。胶质瘤占脑和中枢神经系统肿瘤的30%、占脑恶性脑肿瘤的80%，是人类健康的严重威胁。脑胶质瘤的治疗通常采用手术，放疗和化疗相结合。胶质瘤常发生于脑，手术需要开颅，手术时间长。胶质瘤和正常神经组织交错生长，边界不清，瘤组织不易清理干净，胶质瘤易复发。对于化疗，由于血脑屏障的存在，使普通的抗肿瘤药物疗效不佳。对于放疗，也存在定位困难和对神经损伤的担心。目前胶质瘤仍是医学界的一个难题。因此寻求新的治疗方法和药物迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种可以特异性抑制ADGB的表达siRNA或shRNA，本发明的另一目的在于，提供siRNA或shRNA在制备ADGB靶蛋白表达抑制剂中的应用，以及在制备预防或治疗胶质瘤药物中的应用。

本发明人在前期研究发现ADGB可影响细胞凋亡信号，进一步研究发现干扰ADGB的表达能抑制胶质瘤细胞系的增殖，是治疗胶质瘤潜在的靶点。

发明结合ADGB分子在瘤细胞中的功能，利用RNA干扰技术开发新的治疗药物。

本发明首先设计了靶向ADGB的siRNA，之后再设计成shRNA分子，特异性抑制ADGB的表达，从而抑制胶质瘤的增殖。该siRNA和shRNA分子可能会成为治疗胶质瘤的药物。

本发明的第一方面，是提供一种可以特异性抑制ADGB的表达siRNA或shRNA，

本发明提供了一种特异性抑制Androglobin表达的siRNA，包括正义链和反义链，此siRNA序列为：

正义链：5’-GCAUUUACAGGCGACACAUAU-3’（SEQ ID NO.1）

反义链：5’-AUAUGUGUCGCCUGUAAAUGC-3’（SEQ ID NO.2）

本发明还提供了一种特异性抑制Androglobin表达的shRNA，该shRNA包含上述的siRNA序列，也包括正义链和反义链，此shRNA序列为：