[发明专利]超螺旋DNA含量的测定方法无效
| 申请号： | 201410015213.1 | 申请日： | 2014-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN103852530A | 公开（公告）日： | 2014-06-11 |
| 发明（设计）人： | 王学海;李杰;李莉娥;许勇;何昆;陈爱芳;吕兴凯;田吕明;马梵辛;杨仲文;涂荣华;肖强;张绪文;马铮;裴达;黄韫韬 | 申请（专利权）人： | 人福医药集团股份公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 超螺旋 dna 含量 测定 方法 | ||
1.一种超螺旋DNA含量的测定方法，其特征在于，包括：
采用AKTAexplorerTM10检测仪器并利用分子筛色谱柱对待测样品进行第一检测分离处理，以便获得总DNA样品，计算总DNA样品的质量含量；以及
采用嗜硫芳香色谱柱对所述总DNA样品进行第二检测分离处理，并计算得到超螺旋DNA在所述待测样品中的质量含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一检测分离处理和所述第二检测分离处理采用的紫外检测波长分别为OD260。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子筛色谱柱为5ml-HiTrap Sepharose HP色谱柱。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的嗜硫芳香色谱柱为1ml-HiTrap PlasmidSelect Xtra色谱柱。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一检测分离处理是采用流动相A进行第一洗脱完成的，所述流动相A包含2.1M(NH4)2SO4、10mM EDTA以及100mM Tris-Hcl，pH7.5。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一洗脱的线性流速为60cm/h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二检测分离处理是采用流动相B和流动相C进行第二洗脱完成的，所述流动相B包含2.25M(NH4)2SO4、10mM EDTA以及100mM Tris-Hcl，pH7.5，所述流动相C包含2.0M NaCl、10mM EDTA以及100mM Tris-Hcl，pH7.5。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第二洗脱是以（100%流动相B、0%流动相C）～（45%流动相B、55%流动相C）的梯度洗脱方式进行的。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第二洗脱的线性流速为60cm/h，所述第二洗脱的洗脱体积为11个柱体积。
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