[发明专利]鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化无效
| 申请号： | 201410000614.X | 申请日： | 2014-01-02 |
| 公开（公告）号： | CN103882050A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 王喆明 | 申请（专利权）人： | 杭州璞题生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C07K14/485;C07K1/22;C12R1/84 |
| 代理公司： | 杭州华知专利事务所 33235 | 代理人： | 宁冈 |
| 地址： | 311121 浙江省杭州市余杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表皮 生长因子 巴斯德毕赤 酵母 中的 表达 方法 纯化 | ||
1.一种鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化，其特征在于，包括以下步骤：
（1）构建重组质粒pBSAZ 2.1；
（2）电转化表达pBSAZ 2.1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母；
（3）阳性重组菌株的筛选；
（4）诱导重组菌表达鼠表皮生长因子；
（5）鼠表皮生长因子的纯化。
2.根据权利要求1所述的一种鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化，其特征在于，所述步骤（1）依次包括以下步骤：（a）PCR扩增mEGF-TEV-malE-HIS6基因；（b）将步骤（a）获得的mEGF-TEV-malE-HIS6基因片段和经同样限制性内切酶酶切的质粒pPIC 9k过夜连接处理，将连接产物纯化，转化大肠杆菌JM109感受态中，经过卡纳霉素抗性筛选，挑取阳性克隆子，提取质粒并进行限制性内切酶EcoR I和Not I双酶切鉴定，得到重组质粒pBSAZ 2.1。
3.根据权利要求1所述的一种鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化，其特征在于，所述步骤（2）依次包括以下步骤：（a）、重组质粒pBSAZ 2.1的线性化；b、感受态细胞的制备；c、电转化巴斯德毕赤酵母。
4.根据权利要求1所述的一种鼠表皮生长因子在巴斯德毕赤酵母中的表达方法和纯化，其特征在于，所述步骤（3）依次包括如下步骤：（a）利用巴斯德毕赤酵母GS115组氨酸营养缺陷型筛选整合重组菌；（b）G418抗性筛选高拷贝菌株。
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