[发明专利]一种新型精子洗涤培养液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型精子洗涤培养液，其特征是含有一定浓度的神经营养因子，并公开了该精子洗涤培养液的制备方法。按照该方法制备获得的新型精子洗涤培养液，稳定可靠，溶解度良好，使用该新型精子洗涤培养液洗涤精液样品后，能够明显加快精子的运动速度，提高精子活力，增加洗涤培养液中精子存活率和存活时间，表现为促进生殖的效果。该精子洗涤培养液可以用于体外精子制备和精子储存的培养液，应用于人工授精等辅助生殖领域。 

背景技术

不孕不育是严重影响人类生活质量的疾病，目前全球约有10％～15％的家庭面临生育难题。世界卫生组织预测，在21世纪，不育症将成为仅次于肿瘤和心血管疾病的第三大疾病。男性不育主要由于精子浓度和活力下降引起。现代辅助生殖技术实践证明体外精子洗涤可增加精子的活力促进生殖能力。 

在行宫腔内人工授精时必须行精液洗涤，而精液洗涤的主要作用包括去除精液中的前列腺素及其他可引起子宫痉挛及疼痛的物质，去除精液中可引起感染及其他副作用的细菌和化学物质，同时增加了精子的获能，从而增强其受孕能力，进而有可能去除影响精子功能的抗体。 

精液洗涤方法是使用精子洗涤液，常用的精子洗涤液配方公开，由此多使用商品化的产品，也可自行配置，但是临床实践中发现一些样品使用洗涤液后会降低精子的活力，有的甚至会影响精子的受孕能力。 

此外，在洗涤后有时候还需要精子培养液保存精子，以协助保持精子活力，延长存活时间。如果在洗涤过程中使用的洗涤液不具备培养液的功能，就需要更换为专门的培养液保存精子。如果在洗涤过程中使用的洗涤液具有一定的培养液的功能，一般不需要更换专门的培养液，直接将精子保存在洗涤液中。因此有些精子洗涤液本身就是培养液，故称精子洗涤培养液。 

本发明公开了一种新型的精子洗涤培养液配方，通过在现有精子洗涤培养液中添加适应浓度的神经营养因子。使用该精子洗涤培养液处理同一批精液样品，结果与现有的精子洗涤培养液比较，证明该精子洗涤培养液能够明显加快精子的运动速度，提高精子的存活率，延长精子活力的时间，有利于受孕。 

发明内容

本发明涉及一种含有神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的新型精子洗涤培养液。发明人通过实验证明了在精子洗涤培养液中添加适宜浓度的NGF，在体外对人精子的活力具有促进作用，使精子继续保持直线运动状态，同时公开了这种精子洗涤培养液的制备方法。通过本发明获得的精子洗涤培养液可以用 于体外培养条件下精子洗涤和保存，也可用于促进女性受孕能力，进而实现体外治疗由于男性精子活力下降引起的生殖障碍疾病或者用于人工辅助生殖技术，具有较好的经济效益和社会效益。 

该药物组合物包括NGF和其他添加剂。本发明中作为主药的NGF一般为鼠源性，也可以是人源性或者基因工程产品等。它们在组合物中含量可以是0.1μM～100μM(浓度)，优选的是0.1μM～10μM(浓度)，更优选的是1μM～50μM(浓度)。 

制备方法 

材料 

神经生长因子，鼠颌下腺提取的鼠源性NGF，可以是溶液或者冻干粉，由符合GCP认证的制药厂生产，效期安全。 

基础精子洗涤培养液：可以使用商品化的精子洗涤培养液，由符合GCP认证的制药厂生产，效期安全。也可自行配置，其制备方法如下：F-104.9g，KHCO₃0.225g，NaHCO₃0.84g，乳酸钙0.142g，MgSO₄·7H₂O0.062g，青霉素钾0.052mg，上述试剂分别溶于500ml蒸馏水中，测pH值7.3～7.5，调节渗透压为280～290mmol／L(mOsm／kg)H₂O，再用0.22μm微孔过滤器过滤，4℃冰箱内备用。洗涤培养液使用前，90ml洗涤培养液加10ml脐血清，37℃预温后使用。 

含NGF的新型精子洗涤培养液的制备：在基础精子洗涤培养液中加入一定量NGF，控制终浓度，使用再用0.22μm微孔过滤器过滤除菌，4℃冰箱内备用。使用前90ml洗涤培养液加10ml脐血清，37℃预温后使用。 

效果验证