[发明专利]表达序列

权利要求书

1.编码一前导序列的分离的核酸，所述前导序列是SEQ ID NO:12的氨基酸序列的前导肽，其中该核酸由SEQ ID NO:19的核苷酸序列或SEQ ID NO:19的密码子优化的变体组成。

2.编码一前导序列的分离的核酸，所述前导序列是SEQ ID NO:3的氨基酸序列的信号肽，其中该核酸由SEQ ID NO:16的核苷酸序列或SEQ ID NO:16的密码子优化的变体组成。

3.根据权利要求1-2中任意一项所述的核酸，其中所述核酸为DNA。

4.根据权利要求1-2中任意一项所述的核酸编码的分离的前导序列。

5.根据权利要求4所述的前导序列，其中所述前导序列是一肽，所述肽由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:12的氨基酸序列组成。

6.表达组件，其包含一编码前导序列的核酸，所述编码前导序列的核酸与编码POI的核酸序列融合，其特征在于，所述前导序列选自由以下组成的组：

(a)SEQ ID NO:12的氨基酸序列的前导肽，所述编码前导序列的核酸是一编码前导肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列由SEQ ID NO:19的核苷酸序列或SEQ ID NO:19的密码子优化的变体组成，

(b)SEQ ID NO:3的氨基酸序列的信号肽，所述编码前导序列的核酸是一编码前导肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列由SEQ ID NO:16的核苷酸序列或SEQ ID NO:16的密码子优化的变体组成。

7.根据权利要求6所述的表达组件，其中所述POI包含一具有天然N末端氨基酸序列的氨基酸序列。

8.根据权利要求6或7所述的表达组件，其中，POI选自以下组成的组：治疗性蛋白，包括抗体或其片段、酶和肽类、蛋白质抗生素、毒素融合蛋白、碳水化合物-蛋白质结合物，结构蛋白、调节蛋白、疫苗和类疫苗蛋白或颗粒、过程酶、生长因子、激素和细胞因子，或者其中所述POI介导宿主细胞代谢物的产生。

9.根据权利要求8所述的表达组件，其中POI选自以下组成的组：生长因子、激素、细胞因子、抗体或抗体片段。

10.根据权利要求9所述的表达组件，其中所述POI选自以下组成的组：全长抗体、scFv、微抗体、双特异抗体、三特异性抗体、四特异性抗体、Fab和Fc融合蛋白。

11.根据权利要求6-10中任意一项所述的表达组件，进一步包括一启动子，所述启动子可操作地连接到编码前导序列的核酸。

12.包含根据权利要求6-11中任意一项所述的表达组件的重组酵母宿主细胞或载体。

13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中酵母选自以下属组成的组：毕赤酵母属、假丝酵母属、球拟酵母属、Arxula酵母属、汉逊氏酵母属、Ogatea酵母属、耶氏酵母属、克鲁维酵母属、酵母属或Komagataella酵母属。

14.一种在酵母宿主细胞中生产POI的方法，包括：

-提供根据权利要求12或13的宿主细胞，

-培养所述宿主细胞以表达所述POI，以及

-纯化POI以获得纯化的POI制品。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述POI包含一具有天然N末端氨基酸序列的氨基酸序列。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述POI包含一氨基酸序列，所述氨基酸序列不包括一额外的丙氨酸作为N末端氨基酸残基。