[发明专利]用于产生单体和多聚体分子的方法及其用途

权利要求书

1.用于产生作为2聚体或3聚体具有生物活性且在缺乏融合的Fc区的情况下表达时形成非限定的聚集体/多聚体的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a)培养包含编码根据式II的融合多肽的核酸的细胞

B_n-CS_o-I_s-CS_p-FC¹-CS_q-I_t-CS_r-B_m:FC² (式II)

其中

B表示作为2聚体或3聚体具有生物活性且在缺乏融合的Fc区的情况下表达时形成非限定的聚集体/多聚体的多肽，

FC¹表示第一重链Fc区多肽，

FC²表示第二重链Fc区多肽，

CS表示切割位点，和

I表示间插氨基酸序列，

其中，n＝1且m＝0，或n＝0且m＝1，

其中，如果n＝1，则o＝0或1，并且如果o＝0，则p＝0或1，并且如果o＝1，则p＝0，并且s＝0或1，并且q＝0，并且t＝0，并且r＝0，

其中，如果m＝1，则q＝0或1，并且如果q＝0，则r＝0或1，并且如果q＝1，则r＝0，并且t＝0或1，并且o＝0，并且s＝0，并且p＝0，

其中FC¹和FC²通过一个或多个二硫键共价连接，

其中FC¹和FC²基本上不结合Fc受体；

b)从细胞或培养基回收融合多肽，

c)用蛋白酶切割融合多肽，

并从而产生作为2聚体或3聚体具有生物活性且在缺乏融合的Fc区的情况下表达时形成非限定的聚集体/多聚体的多肽。

2.根据权利要求1的方法，特征在于B选自IL17、TWEAK、TNF和其他TNF家族成员、TL1a、IL18、IL18R、IL33和IL33R的组。

3.根据权利要求1的方法，特征在于FC是选自人IgG1重链多肽、人IgG2重链多肽、人IgG3重链多肽、人IgG4重链多肽、鼠IgG1重链多肽、鼠IgG2重链多肽、鼠IgG3重链多肽、兔IgG重链多肽的组的重链多肽的变体。

4.根据权利要求1的方法，特征在于Fc受体是Fcγ受体。

5.根据权利要求3的方法，特征在于人IgG1重链多肽在氨基酸位置234、235和329中的一个或多个处突变为L234A、L235A和P329G。

6.根据权利要求5的方法，特征在于人IgG1重链多肽是氨基酸突变为L234A和L235A、或者氨基酸突变为L234A、L235A和P329G的人IgG1重链多肽。

7.根据权利要求3的方法，特征在于FC是突变为S228P、L235E和P329G的人IgG4重链多肽的FC。

8.根据权利要求3的方法，特征在于人IgG重链多肽是氨基酸突变为I253A、H310A和H435A的人IgG重链多肽。

9.根据权利要求1的方法，特征在于第一Fc是突变为T366W的Fc，并且第二Fc是突变为T366S、L368A和Y407V的Fc。

10.根据权利要求9的方法，特征在于第一Fc是还突变为S354C的Fc，并且第二Fc是还突变为Y349C的Fc。

11.根据权利要求10的方法，特征在于：

a)n＝1，并且m＝0，并且与第一FC融合的B和与第二FC融合的B相同，

b)n＝1，并且m＝0，并且与第一FC融合的B和与第二FC融合的B不同，

c)n＝0，并且m＝1，并且与第一FC融合的B和与第二FC融合的B相同，

d)n＝0，并且m＝1，并且与第一FC融合的B和与第二FC融合的B不同。