[实用新型]一种鸡大肠杆菌病检测用试剂盒

说明书

技术领域

　　本实用新型涉及的是生物技术领域，尤其是一种应用于鸡大肠杆菌病检测过程中用的试剂盒。

背景技术

鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的一种常见多发病。其中包括大肠杆菌性腹膜炎、输卵管炎、脐炎、滑膜炎、气囊炎、肉芽肿、眼炎等多种疾病，对养鸡业危害较大。

1、临床症状

由致病性大肠杆菌引起的疾病在临诊上表现极其多样化。现仅就文献报道的归纳如下：     （1）急性败血型  

病鸡不显症状而突然死亡；或症状不明显；部分病鸡离群呆立，或挤堆，羽毛松乱，食欲减退或废绝，排黄白色稀粪，肛门周围羽毛污染，发病率死亡率较高，这是目前危害最大的一个型。通常所说的鸡大肠杆菌病指的就是这个型。目前对本型的诊断主要靠临诊时剖检死、病鸡只，肉眼观察病理变化作出。     （2）卵黄性腹膜炎又称“蛋子瘟”

这是笼养蛋鸡的一种重要疾病。病鸡的输卵管常因感染大肠杆菌而产生炎症，炎症产物使输卵管伞部粘连，漏斗部的喇叭口在排卵时不能打开，卵泡因此不能进入输卵管而跌入腹腔而引发本病。广泛的腹膜炎产生大量毒素，可引起发病母鸡死亡。不少蛋鸡场或种鸡场常因本病造成重大经济损失。此种死、病母鸡，外观腹部膨胀、重坠。     （3）输卵管炎  

多见于产蛋期母鸡。输卵管充血、出血，或内有多量分泌物，产生畸形蛋和内含大肠杆菌的带菌蛋，严重者减蛋或停止产蛋。     （4）肠炎  

病鸡肛门下方羽毛潮湿、污秽、粘连，这是本菌引起腹泻的一种征兆。 （5）生殖器官病  

患病母鸡卵泡膜充血，卵泡变形，局部或整个卵泡红褐色或黑褐色，有

的硬变，有的卵黄变稀。有的病例卵泡破裂，输卵管粘膜有出血斑和黄色絮状或块状的干酪样物；公鸡睾丸膜充血，交媾器充血、肿胀。从上述病变器官均可分离到致病性大肠杆菌。还有报道，本菌会引起母鸡卵泡囊肿。     （6）关节炎或足垫肿  

幼、中雏感染居多。一般呈慢性经过，病鸡关节肿胀，跛行，从此类病鸡的关节或足垫中常可分离到大肠杆菌。     （7）肉芽肿  

部分成鸡感染本菌后常在肠道等处产生大肠杆菌性肉芽肿。十二指肠和盲肠等部位以及偶尔在肝和脾脏产生肉芽肿，病变可从很小的结节到大块组织坏死。     （8）死胚和孵化率低下  

本菌经蛋传播或穿透蛋壳进入蛋内的情况下，即可发生。 （9）蛋黄囊炎和脐炎  

指幼鸡的蛋黄囊、脐部及其周围组织的炎症。主要发生于孵化后期的胚

胎及1～2周龄的雏鸡，死亡率为3％～10％，甚者高达40％。表现为蛋黄吸收不良，脐部闭合不全，腹部胀大下垂等异常变化。引起本病的病因相当复杂，但据报道，以大肠杆菌导致的发病率为最高。     （10）全眼球炎  

患大肠杆菌性全眼球炎的病鸡，眼睛灰白色，角膜混浊，眼前房积脓，常因全眼球炎而失明。     （11）大肠杆菌性脑病  

本病为广东禽病工作者近年所报道。发现血清型022、053和086：B7等大肠杆菌能突破鸡的血脑屏障进入脑部，引起病鸡昏睡、神经症状和下痢，不吃不喝，难以治愈。且该菌在脑的分离成功率最高。本病可在滑膜支原体病、败血支原体病、传染性鼻炎和传染性喉气管炎的基础上继发或混合感染，又可独立发生。

2、检测手段

目前对鸡大肠杆菌病的监控及检测方法一般是国际上通用的培养法，具体步骤如下：

（1）增菌

采集样品，于无菌条件下，称取样品25g，加在225mL营养肉汤中，用均

质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎，取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶中，于36±1℃培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。

（2）分离

将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红

美兰琼脂平板。对于污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美兰平板，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。

（3）生化试验

自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂或克氏双糖铁琼

脂。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36℃培养过夜。