[发明专利]一种抑制金黄色葡萄球菌QS系统表达的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物与基因技术领域，具体涉及一种抑制金黄色葡萄球菌QS系统表达的方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌（S.a）是引起慢性肺部感染、医学材料相关感染等疾病的常见病原体，这种慢性、持续性感染多与细菌生物被膜形成密切相关，其具有难治性和高致死性的特点。研究表明S.a生物膜的形成与胞间多糖粘附素（Polysaccharide intercellular adhesion,PIA）和QS系统有关，ica操纵子表达产物PIA是与S.a生物被膜形成密切相关的表面成分，可介导细菌粘附，促进其相互聚集，而QS系统主要通过agrA、sarA、RNAIII基因调控BF的形成，此外，RNAIII自身除了包含有编码δ-毒素基因外，还可以增加编码多种胞外蛋白基因的表达，如溶血素、肠毒素、杀白细胞素等。如何控制这些基因编码，抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成，解决金黄色葡萄球菌的耐药性问题，成为了一大难题。

发明内容

本发明的目的是控制金黄色葡萄球菌相关基因的编码，进而抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成，本发明采用实时荧光定量PCR的方法检测QS相关基因agrA、sarA、RNAIII以及调控PIA形成的相关基因ica在黄芩素作用后的表达情况。实现本发明目的所采用的技术方案为：

一种抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的方法，包括PCR引物设计、提取RNA、RNA逆转录、PCR 扩增目的基因和实时荧光定量PCR分析，具体步骤如下：

（1）PCR引物设计

根据Genebank 中S.aNC_002952基因为模板，agrA、sarA荧光定量用上、下游引物引物由Takara大连宝生物有限公司合成, 以16srRNA为标准内参,内参基因16srRNA采用S. Sabersheikh, N.A. Saunders的引物序列，目的基因RNAIII、ica引用HeRdy Eleaume, SaRd Jabbouri采用的引物序列，所扩增的片段大小见表1。

表1  qRT-PCR所用引物