[发明专利]用于基因组DNA永久保存的接头及方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于基因组DNA永久保存的接头及方法。

背景技术

DNA是染色体的重要组成成分，是真核生物的遗传基本物质，含有物种个体的遗传信息，可用于构建基因文库、分离所需的基因和检测相关的分子标记等。由于DNA所含的遗传信息量大，并且容易获取，具有极其稳定的化学性质，是目前种质资源和遗传资源收集和保存的主要内容之一。DNA分子的序列结构具有三个重要特性：（1）不同个体序列不一样；（2）终生不变；（3）同一人体各不同部位细胞中的DNA序列相同，因此DNA分子本身具备档案的特性，即具有长期稳定性、信息属性、个体特异性和可以备查的属性。实际上，在疾病基因组学、药物基因组学、群体遗产学和进化等研究领域，DNA是最可靠的证据和研究过程的基本材料，被广泛应用。同时生命科学研究者日益认识到保存DNA对于今后系统生物医学的发展的重要性，各国纷纷开始保存DNA。世界上最早开始实施大规模DNA保存的是冰岛的Decode公司，全部DNA样本及其相关资料来自于将近1/3的冰岛成年人和90%以上的冰岛老年人。利用其建立的生物样本库。Decode找到了心肌梗塞等20多种疾病的致病基因。随后英国、美国、以色列等国家研究单位建立了类似的遗产资源样本库，并且以色列对外销售这些资料齐全的人的DNA样本。

基因组DNA的长期保存的主要挑战来源于核酸酶的污染。核酸酶通过分解水解核苷酸之间的磷酸二酯键使DNA降解。传统的DNA保存方法是使用无菌超纯水或TE洗脱基因组DNA，于-20℃保存，由于TE溶液中含有EDTA，可以和金属离子络合后降低核酸酶的活性，以此来尽可能的降低污染核酸酶的活性，延长基因组DNA保存的时间。有文章报道为了尽可能的降低酶活，用高浓度的酒精-20℃保存，使用时离心除去酒精，或者利用更低温度（-80度）保存。上述这些现有的在抽提完基因组DNA后保存在特定的溶液中的方法操作比较简单直观，但是并没有从根本上杜绝核酸酶的消化作用，而仅仅是尽可能的降低其活性，保存的效果有好有差。特别是由于核酸酶活性较强，很难灭活，在保存温度发生变化，DNA重复冻融的情况下，往往会出现较大范围的DNA降解。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对目前方法无法从根源上杜绝核酸酶的影响，导致DNA长期保存过程中降解的问题，提供用于基因组DNA永久保存的接头及方法。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

用于基因组DNA永久保存的接头，其特征在于，接头序列两端带有硫代碱基修饰。

优选的，所述接头包括接头1和接头2，其中所述接头1包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的DNA分子，所述接头2包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的DNA分子。

本发明还提供了一种基因组DNA永久保存的方法，按照构建DNA短片段文库的方法，将用于基因组DNA永久保存的接头与随机打断样品基因组DNA片段连接后扩增保存。

优选的，所述方法具体为随机打断样品基因组DNA为一定长度的片段，在每个片段上分别连接序列两端带有硫代碱基修饰的接头，利用与接头组匹配的引物在高保真酶体系中扩增后低温保存。

优选的，所述在片段连接带有硫代碱基修饰的接头前还包括片段末端补平和加A的步骤。

优选的，所述打断为物理打断或限制性内切酶酶切。

优选的，所述打断后的样品片段的长度为100bp-700bp。

优选的，所述序列两端带有硫代碱基修饰的接头包括接头1和接头2，其中所述接头1包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的DNA分子，所述接头2包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的DNA分子。

优选的，所述引物为核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的DNA分子和核苷酸序列SEQ ID NO:6所示的DNA分子。

优选的，所述高保真酶为Phusion超保真DNA聚合酶。

优选的，所述低温保存为于1×TE缓冲液中-20℃保存。