[发明专利]用于基因组DNA永久保存的接头及方法在审
| 申请号： | 201310689316.1 | 申请日： | 2013-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN103849617A | 公开（公告）日： | 2014-06-11 |
| 发明（设计）人： | 覃振东 | 申请（专利权）人： | 复旦大学;江苏基谱生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵;冯琼 |
| 地址： | 200433 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 基因组 dna 永久 保存 接头 方法 | ||
1.用于基因组DNA永久保存的接头，其特征在于，接头序列两端带有硫代碱基修饰。
2.根据权利要求1所述接头，其特征在于，所述接头包括接头1和接头2，其中所述接头1包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的DNA分子，所述接头2包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的DNA分子。
3.一种基因组DNA永久保存的方法，其特征在于，按照构建DNA短片段文库的方法，将用于基因组DNA永久保存的接头与随机打断样品基因组DNA片段连接后扩增保存。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述方法具体为随机打断样品基因组DNA为一定长度的片段，在每个片段上分别连接序列两端带有硫代碱基修饰的接头，利用与接头组匹配的引物在高保真酶体系中扩增后低温保存。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述在片段连接带有硫代碱基修饰的接头前还包括片段末端补平和加A的步骤。
6.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述打断为物理打断或限制性内切酶酶切。
7.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述打断后的样品片段的长度为100bp-700bp。
8.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述序列两端带有硫代碱基修饰的接头包括接头1和接头2，其中所述接头1包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的DNA分子，所述接头2包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的DNA分子。
9.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述引物为核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的DNA分子和核苷酸序列SEQ ID NO:6所示的DNA分子。
10.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述高保真酶为Phusion超保真DNA聚合酶。
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