[发明专利]一种特利加压素及其杂质的超高效液相色谱检测方法

权利要求书

1.一种分离分析特利加压素及其杂质的方法，包括以下步骤： 

在超高效液相色谱仪中，将分别以缓冲液与有机溶剂按不同比例配制的流动相A和流动相B按不同比例混合作为流动相，以流速0.4～0.6mL/min梯度洗脱含特利加压素及杂质的样品， 

其中，所述流动相A为含有5～30％上述有机溶剂的缓冲液，所述流动相B为含有30～60%上述有机溶剂的缓冲液； 

其中所述有机溶剂选自下列化合物：甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇；所述缓冲液为由磷酸-三乙胺、加磷酸调节pH至3.0～3.5或加氨水调节pH至6.0～6.5的水溶液，浓度为10mmol/L～50mmol/L； 

其中所述杂质的结构如下： 

1）杂质A 

Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂； 

2)杂质B 

Gly-Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂； 

3）杂质C 

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asp-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂； 

4）杂质D 

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂； 

5）杂质E 

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-Gly-NH₂； 

6）杂质F 

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-D-Pro-Lys-Gly-NH₂。

2.权利要求1的方法，其中所述超高效液相色谱的色谱柱填料为CHS十八烷基键合硅胶填料，柱温为50℃，柱压为6000psi。 

3.权利要求1的方法，其中所述流速为0.5mL/mim。 

4.权利要求1的方法，其中所述有机溶剂为乙腈与甲醇，优选乙腈。 

5.权利要求1的方法，其中所述缓冲液为由磷酸-三乙胺加氨水调节 调节pH至6.2的水溶液，浓度为10mmol/L。 

6.权利要求1的方法，其中所述缓冲液为由磷酸-三乙胺加磷酸调节调节pH至3.2的水溶液，浓度为10mmol/L。 

7.权利要求1的方法，其中所述流动相A为含有10～30％有机溶剂的缓冲液，流动相B为含有40～60％上述缓冲液的有机溶剂，优选含有50％上述缓冲液的有机溶剂。 

8.权利要求1的方法，其中所述流动相A为含有5%有机溶剂的缓冲液，流动相B为含有40％上述缓冲液的有机溶剂。 

9.权利要求6的方法，其中所述流动相A为乙腈/缓冲液=10∶90的溶液，流动相B为缓冲液/乙腈=60∶40的溶液。 

10.权利要求1-7任一项的方法，其中所述梯度为：在0～5分钟时，两相混合后流动相中的有机相比例为5～20％；在5～20分钟时间段内，逐渐增加有机相比例至30％～40％，保持10分钟，然后在5分钟内将有机相比例降回5～20％。