[发明专利]一种含有石斛多糖的药物组合物

权利要求书

1.一种含有石斛多糖的药物组合物，其特征在于药物组合物中含有石斛多糖0.1-10重量份，维生素0.005-3重量份，矿物质0.05-3重量份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的维生素包括维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E、叶酸、维生素K、维生素H、维生素P、维生素PP、维生素M、维生素T、维生素U、生物素、水溶性纤维素、烟酰胺、泛酸、胡萝卜素中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的矿物质为钙、铁、锌、硒、磷、钾、氯、镁、铜、锰、碘、铬、钼、镍、锡、硅、钒、钴、硫、钠、氟、锶中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中石斛多糖由天然石斛的提取物、人工仿生石斛的提取物、天然石斛中分离得到的组织经发酵制得的提取物、天然石斛中分离得到的组织经悬浮法制得的提取物、天然石斛中分离得到的菌种经发酵制得的提取物、天然石斛中分离得到的菌种经悬浮法制得的提取物、天然石斛的内生菌中分离得到的组织经发酵制得的提取物、天然石斛的内生菌中分离得到的组织经悬浮法制得的提取物、天然石斛的内生菌中分离得到的菌种经发酵制得的提取物、天然石斛的内生菌中分离得到的菌种经悬浮法制得的提取物。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于药物组合物制备的药物制剂或食品。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于药物组合物制备成片剂，其中片剂的组成为：10-30重量份的含有石斛多糖的组合物，3-5重量份的交联聚维酮，0.5-1重量份的硬脂酸镁。

7.根据权利要求1所述的药物组合物在制备提高免疫力药物中的应用。

8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的石斛多糖的制备由以下方法制备：

步骤1：石斛共生真菌菌种的制备：将新鲜的石斛全株在流水下冲洗5-10分钟，并用毛刷去除表面附着物，然后放置于吸水纸上，无菌操作进行表面消毒处理；将处理好的0.05-0.3cm²的根段置于分离培养基上，于20-28℃恒温培养10-50天；当切口边缘长出真菌菌丝时，得到菌丝体；

所述的分离培养基由葡萄糖或蔗糖10-40g／L、酒石酸铵0.5-10g／L、马铃薯或香蕉100-300g／L、麦麸10-100g／L、苔藓汁或地衣汁50-150g／L、氯霉素0.5-10g／L、磷酸二氢钾0.5-10g／L、硫酸镁0.5-10g／L、蛋白胨0.5-10g／L、琼脂0.5-30g/L组成；pH值为5-8，灭菌条件为：121℃、20分钟；

步骤2：疏松愈伤组织培养：(1)植物体的选择及无菌处理，选择新鲜石斛的根、茎、叶、外生菌根的一种为外植体，进行清洗和无菌处理，制成0.1-0.8cm²大小的植物组织；(2)，愈伤组织诱导培养，将经过无菌处理后的植物组织在共生法培养基或6,7-V培养基中进行愈伤组织诱导培养，培养时间：10-60天，20±5℃，暗箱或自然光照，pH值为4.0-9.0，继代培养1-8次，直至诱导出疏松愈伤组织；

所述共生法培养基由MS或N6,0.5-30g/L琼脂，0.5-50g／L蔗糖，0.5-50g／L葡萄糖，0.5-50g／L蛋白胨，0.5-150g／L胡萝卜汁，0.5-50g／L麦芽汁，0.5-50g／L麦麸，50-150g／L苔藓汁或地衣汁，0.5-150g／L香蕉或椰子汁，0.5-10g/L2,4-D，0.5-5g／LKT，0.5-10g／L6-苄氨基腺嘌呤，0.5-10g／Lα-萘乙酸，0.5-100g/L马铃薯汁，0.5-10g／L活性碳，0.5-10g／L硝酸铈，0.5-10g／L硝酸铵，0.5-50g／L酵母膏组成；

步骤3：将步骤1中获得的菌丝块紧贴疏松愈伤组织旁同时接种于共生法培养基中，培养条件为：温度20±5℃，pH值为4.0-9.0，暗箱或自然光照，摇床转速100-300转／分钟，培养20-90天；

步骤4：将悬浮发酵培养的细胞及培养液浓缩后置于超声波发生器中水浸提，料液比1：10-30，在超声功率100-300W，超声时间10-100min，提取温度100℃的条件下进行提取，滤渣在相同条件下重复浸提3次，合并滤液，在真空旋转蒸发器中浓缩；向浓缩后的溶液中加入95％乙醇，经抽滤、真空干燥后得到石斛多糖。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的石斛多糖的制备由以下方法制备：

步骤1：取石斛茎杆、菌根、叶片，浸于70％乙醇中30s，再浸于0.1％HgCl₂溶液中浸泡5min；取出后经无菌水冲洗三遍，制成0.1-0.8cm²大小的植物组织块，于20-28℃恒温避光培养10-50天；当切口边缘长出真菌菌丝时，得到菌丝；分别从直径3cm以上的菌群边缘，用接种环挑取菌丝，并接种于培养基上，于20-28℃，摇床转速100-300rpm暗箱培养10天-50天，获得菌液；

步骤2：通过高效液相色谱法检测菌液中石斛多糖含量，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪进行检测；根据检测结果，从大量候选菌株中筛选得到石斛多糖高产量菌株；继代培养1-8次，应将较大的团块和接种物残渣除去；

步骤3：将筛选得到石斛多糖高产量菌株按照2-10％的接种量接种到培养基中于20-35℃，摇床转速100-300rpm暗箱培养或自然光照，培养时间1天-25天；

步骤4：将所得发酵液装入萃取釜，进行超临界CO₂萃取；萃取压力为10-100Mpa，萃取温度为30-100℃，分离压力为5-10Mpa，分离温度为10-100℃；CO₂流量为10-100L／h，萃取1-8h；将超临界萃取液与丙酮以1：10的比例混合搅拌0.1-5h，0-60℃静置1-20h，分离得到清液与膏状物；将膏状物减压蒸馏回收丙酮溶剂，干燥，得到石斛多糖；

所述培养基由马铃薯汁0.5-200g／L，葡萄糖2-10g／L，蔗糖10-20g／L，蛋白胨0.5-2.5g／L，醋酸钠0.5-3g／L，MgSO₄2-5mg／L，Ca(NO₃)₂5-100mg／L、CuSO₄0.5-300mg／L，ZnSO₄0.5-200mg／L，MnCl₂1-25mg／L，FeCl₃0.5-10mg／L，KH₂PO₄10-350mg／L，维生素B10.5-10mg／L，维生素B60.5-30mg／L，苯丙氨酸0.5-5mg／L，苯甲酸钠100-1000mg／L，乙酰水杨酸钠0.5-5mg／L，甲醇5-20ml／L、油酸0.5-10ml／L，苔藓汁或地衣汁50-200g/L，琼脂0.5-20g／L组成，其pH值为4-9，在121℃灭菌20分钟后制得。