[发明专利]一种多模块DNA文库及转录激活子样效应因子核酸酶质粒的构建方法

权利要求书

1.转录激活子样效应因子核酸酶质粒的构建方法，包括连接TALENs识别模块的连接，步骤包括：

（1）根据所需识别目的基因靶序列的碱基序列，从多模块单元库中选择对应的连接单元；

所述的多模块单元库包括：

16组×n个双碱基连接单元和4组×m个单碱基识别连接单元，所需识别的碱基序列长度为2*n+2-m至2*n+1；n=10-15，m=3-9；

所述的单碱基连接单元为识别一个碱基的单碱基识别模块及两端经二类限制性内切酶酶切形成的第一粘性末端和第二粘性末端；任意两组单碱基连接单元的粘性末端碱基序列一一对应相同；对单碱基连接单元进行顺序编号，第k个单碱基连接单元的第二粘性末端与第k+1个单碱基连接单元I的第一粘性末端互补，1≤k≤m-1；

所述的单碱基识别模块为编码SEQ ID No.1～4所示氨基酸序列的核苷酸；

所述的双碱基连接单元为识别两个碱基的双碱基识别模块及两端经二类限制性内切酶酶切形成的第一粘性末端和第二粘性末端；任意两组双碱基连接单元的粘性末端碱基序列一一对应相同；

所述的双碱基识别模块为编码SEQ ID No.5～20所示氨基酸序列的核苷酸；

每组双碱基连接单元分为两个部分，第一部分的双碱基连接单元数量为p个，对第一部分双碱基连接单元进行顺序编号，第i个双碱基连接单元的第二粘性末端与第i+1个双碱基连接单元的第一粘性末端互补，1≤i≤p-1；第二部分的双碱基连接单元数量为q个，对第二部分双碱基连接单元进行顺序编号为p+2～n+1，第j个双碱基连接单元的第二粘性末端与第j+1个双碱基连接单元的第一粘性末端互补，p+2≤j≤n+1；其中，每组第一部分的最后一个双碱基连接单元的第二粘性末端与编号为第p+1个单碱基连接单元的第一粘性末端互补；每组第二部分的第一个双碱基连接单元的第一粘性末端与编号第p+1个单碱基连接单元的第二粘性末端互补，1<p+1≤m；各组双碱基识别模块的粘性末端碱基序列一一对应相同；

每个单碱基或双碱基连接单元的粘性末端有4个碱基，沿5’-3’方向，正义链的第一粘性末端的第2～4个碱基编码亮氨酸，正义链的第1个碱基为甘氨酸密码子的最后一个碱基；正义链的最后两个碱基为甘氨酸密码子的前两个碱基；沿5’-3’方向，反义链的第二粘性末端的第1～3个碱基的互补序列编码亮氨酸，第4个碱基的互补序列为甘氨酸密码子的最后一个碱基；反义链的前两个碱基的互补序列为甘氨酸密码子的前两个碱基；

同一组的所有双碱基连接单元或单碱基连接单元两端粘性末端的序列互不相同；

（2）用二类限制性内切酶和DNA连接酶，将连接单元重组接入TALENs载体中，用消化线性DNA的酶进行消化处理，得到转录激活子样效应因子核酸酶质粒。