[发明专利]一种以蔗糖为原料生物转化生产甘露醇的方法有效
| 申请号： | 201310643082.7 | 申请日： | 2013-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN103642745A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 李玉;路福平;陈艳;王正祥;田康明 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王伟锋 |
| 地址： | 300457 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蔗糖 原料 生物转化 生产 甘露醇 方法 | ||
1.一株表达蔗糖水解酶和甘露醇脱氢酶的重组大肠杆菌，该菌株可表达来源于植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的蔗糖水解酶基因sacA和布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）的甘露醇脱氢酶基因mdh。
2.根据权利要求1所述表达蔗糖水解酶和甘露醇脱氢酶的重组大肠杆菌，由以下方法制得，将Lactobacillus plantarum中蔗糖水解酶基因和Lactobacillus buchneri中甘露醇脱氢酶基因序列酶切片段连接到载体pET28a上生成共表达质粒pET28a-sacA-mdh，转化到宿主细胞大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞中，将重组质粒pET28a-sacA-mdh转化入表达宿主菌E.coli BL21中获得。
3.一种利用权利要求1所述的重组大肠杆菌以蔗糖为底物发酵生产甘露醇的方法，步骤为：重组大肠杆菌pET28a-sacA-mdh/BL2137℃培养，OD600达到0.5-0.8时，添加诱导剂IPTG（0.05-0.2mmol/L）后至少一次添加底物蔗糖，于22-25℃发酵培养8-12h，底物蔗糖的总量控制在110-180g/L。
4.根据权利要求3所述重组大肠杆菌以蔗糖为底物发酵生产甘露醇的方法，其特征在于，先加入70-80g/L的底物蔗糖，22-25℃诱导培养5h后再添加35-45g/L蔗糖，培养5h。
5.根据权利要求3所述重组大肠杆菌以蔗糖为底物发酵生产甘露醇的方法，其特征在于，先加入35-45g/L的底物蔗糖22-25℃诱导培养3h，后再添加35-45g/L的蔗糖，培养4h后补加35-45g/L的蔗糖，继续培养3h。
6.根据权利要求3-5任一所述重组大肠杆菌以蔗糖为底物发酵生产甘露醇的方法，其特征在于，添加诱导剂IPTG0.05-0.2mmol/L。
7.根据权利要求3所述重组大肠杆菌以蔗糖为底物发酵生产甘露醇的方法，其特征在于，发酵过程中控制pH=5.5-7.0，转速200r/min。
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