[发明专利]新霉素、泰乐菌素二合一金标微孔试纸条

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种同时检测动物源性食品（如牛奶等）中新霉素、泰乐菌素残留量的新霉素、泰乐菌素二合一金标微孔试纸条。

背景技术

新霉素(neomycin，NEO)，属于氨基糖苷类抗生素，是由新霉胺和新霉二糖胺结合而成。其中新霉胺是由D-葡萄糖二胺与脱氧链霉胺结合而成，新霉二糖胺是由D-核糖与新霉糖胺结合而成。新霉素是两个立体异构体新霉素B和新霉素C的混合物，其中以新霉素B为重要成分，临床上多用新霉素的硫酸盐。新霉素是重要的抗感染药物，抗菌谱广，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和结核杆菌均有良好的抑制作用。在兽医临床上，新霉素是治疗畜禽细菌性肠炎的首选药物之一，另外，新霉素还被普遍用于治疗乳腺炎、角膜炎、结膜炎、耳炎、皮炎、外伤感染、足腐烂等疾病。但是由于其对人和动物存在潜在的耳毒性和肾毒，所以对食品中新霉素残留进行检测十分必要。我国农业部235号公告规定的新霉素最高残留限量为：牛奶、羊奶500μg/kg，鸡蛋500μg/kg，牛、羊、猪、鸡、火鸡、鸭的肌肉、脂肪、肝500μg/kg，牛、羊、猪、鸡、火鸡、鸭的肾10000μg/kg。欧盟制定的动物性食品中新霉素最高残留限量规定肌肉、肝脏、脂肪和鸡蛋为500μg/kg，肾脏为5000μg/kg，牛奶为1500μg/kg。

泰乐菌素为大环内酯类抗生素，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、类菌介质和某些病毒有抑制作用，尤其对禽败血支原体、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌极其有效，主要通过抑制细菌细胞内蛋白质的合成而发挥作用。作为兽用抗生素药，泰乐菌素主要广泛用作饲料添加剂和动物治疗，促进禽畜生长，提高饲料的利用率。但是当泰乐菌素在体内蓄积达到一定的浓度，可造成前庭和耳蜗神经的损害，导致眩晕和听力减退，严重者可造成肝、肾及其造血系统的严重损。1999年，欧盟已禁止将泰乐菌素作为饲料添加剂使用，从2006年1月1日起，欧盟成员国全面禁止使用抗生素做为促生长剂。我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》规定，泰乐菌素在畜禽肌肉组织中最大残留限量为200μg/kg。欧盟还规定在猪的肝、肾，家禽的肌肉、皮及脂肪、肝、肾中均不得检出泰乐菌素，美国食品和药品管理局（FDA）规定，泰乐菌素在可食组织和蛋中的残留允许浓度为0.2mg/kg，在乳中为0.05mg/kg，日本规定在肌肉、猪肉、牛肉中允许的残留量是0.05mg/kg。

国内外报道的检测新霉素和泰乐菌素的方法，主要有高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱法（LC-MS）、液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），是检测抗生素最常用的方法，但是在实际操作中需要LC-UV、LC-MS及LC-MS/MS等高档仪器，且处理复杂、繁琐、操作时间长、操作技术要求高。目前尚无可同时检测新霉素和泰乐菌素的残留量的产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种新霉素、泰乐菌素二合一金标微孔试纸条。

本发明提供了一种用于检测新霉素和泰乐菌素的试剂盒，包括至少具有一个样品槽的样品板和至少一个试纸条；

所述样品槽的底部附着有新霉素特异性抗体的胶体金标记物和泰乐菌素特异性抗体的胶体金标记物；

所述试纸条包括底板1、反应膜2、样品吸收垫3和吸水垫4；所述样品吸收垫、所述反应膜和所述吸水垫依次附着于所述底板上，所述样品吸收垫的末端与所述反应膜的始端相连，所述反应膜的末端与所述吸水垫的始端相连；所述反应膜上由始端至末端依次具有T₂线、T₁线和C线，所述T₂线、T₁线和C线均与所述反应膜的轴线垂直；所述T₂线和T₁线上分别包被如下两种偶联物：泰乐菌素-载体蛋白偶联物、新霉素-载体蛋白偶联物；所述C线上包被可与新霉素特异性抗体和/或泰乐菌素特异性抗体结合的抗抗体。

所述新霉素特异性抗体可为新霉素单克隆抗体或新霉素多克隆抗体。所述泰乐菌素特异性抗体可为泰乐菌素单克隆抗体或泰乐菌素多克隆抗体。所述新霉素单克隆抗体具体可为新霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株NEO-5E9CGMCC No.8410分泌的单克隆抗体。所述泰乐菌素单克隆抗体具体可为泰乐菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株TYL-5D6CGMCC No.8409分泌的单克隆抗体。

以上任一所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵白蛋白或人血清白蛋白。

所述新霉素-载体蛋白偶联物中，所述载体蛋白具体可为BSA，新霉素与BSA的摩尔结合比具体可为6:1。