[发明专利]一种同时定量检测多个受体的抗体芯片试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时定量检测多个受体的抗体芯片试剂盒。该试剂盒包括：抗体芯片，选用标准组织玻片作为表面载体，该标准组织玻片采用活性氨基团包被，使多种抗原特异性抗体通过非接触性点样仪牢固地吸附在玻片表面，形成16个微阵列；并用相配套可拆装的2x8孔塑料框架及乳胶封闭框将16个微阵列分隔在互不干扰的小区内。每个捕获抗体在每个抗体微阵列中有四次的重复点样；受体标准品混合物；生物素标记的检测抗体混合物；Cy3荧光染料标记的链霉亲和素。本发明的抗体芯片试剂盒能够同时定量检测多项受体，受体的动态检测范围更广，从单一的样品实验中可以得到四倍于ELISA的重复数据，具有高灵敏度、高通量、样品需用量少、廉价、易推广等优点。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种同时定量检测多个受体的抗体芯片试剂盒。

技术背景

受体（receptor）是一种能与细胞外专一信号分子（配体）结合引起细胞反应的蛋白质。

受体分为细胞表面受体和细胞内受体。受体与配体结合即发生分子构象变化，从而引起细胞反应，如介导细胞间信号转导、细胞间黏合、细胞胞吞等细胞过程。受体在细胞膜上或细胞内能识别生物活性分子并与之结合，把识别和接受的信号正确无误地放大并传递到细胞内部，从而激活或启动一系列生物化学反应，最后导致该信号物质特定的生物效应。通常受体具有两个功能：一是识别特异的信号物质--配体，识别的表现在于两者结合。配体，是指这样一些信号物质，除了与受体结合外本身并无其他功能，它不能参加代谢产生有用产物，也不直接诱导任何细胞活性，更无酶的特点，它唯一的功能就是通知细胞在环境中存在一种特殊信号或刺激因素；二是把识别和接受的信号准确无误的放大并传递到细胞内部，启动一系列胞内生化反应，最后导致特定的细胞反应，促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和杀肿瘤细胞效应，促进或抑制细胞因子的合成，促进炎症过程，影响细胞代谢等。

受体研究具有非常重要的理论和实用意义，它从分子水平来阐明激素、递质、药物、抗体的作用机制及生理和病理过程的，已成为科学技术的前沿阵地之一。

目前常用的受体检测方法主要包括：酶联免疫吸附法（ELISA），放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA），免疫印迹法（western blot），流式细胞仪（Flow-Cytometry）等。其中，酶联免疫吸附法是最普遍的方法，具灵敏度高、特异性较好、操作简便等优点。但一次试验只能检测单一指标，通量低、成本高，在具有多指标特性的受体检测中，该方法存在明显的不足；放射免疫分析（RIA）虽然灵敏度高，是由于具有放射性污染，现在已很少采用；免疫印迹法能测定分子的大小，且无非特异的反应，但操作繁琐，灵敏度低，且只能检测单一指标，不适合运用于受体的检测；流式细胞仪能在细胞水平上检测受体的水平，但却存在低灵敏、低通量、高成本等缺点。

有鉴于此，有必要开发一种新型的多种受体定量检测试剂盒，以克服现有技术中亟待解决的问题，实现多种受体的高通量、高灵敏度、高特异性和低成本检测。在本发明中，我们选用没有空间限制的标准组织玻片作为载体，可使点在同一微阵列上检测受体的数目可以不 受空间的限制。由于玻片具有非常低的自身荧光，而且荧光信号不具扩散性，不同点间的荧光信号不会彼此干扰，所以一次可以同时检测几十个受体。本发明采用抗体夹心法原理在玻片表面进行多重ELISA反应，不仅一次可以检测多达几十个受体，并且所检测的受体灵敏度可达单因子的ELISA检测灵敏度。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种同时定量检测多个受体的抗体芯片试剂盒，能在标准组织玻片上进行高通量、高灵敏度、高特异性和低成本的受体定量检测。