[发明专利]一种艾塞那肽的固相片段合成方法

说明书

技术领域

本发明属于固相多肽合成技术领域，具体涉及全固相片段组装合成艾塞那肽。

背景技术

艾塞那肽是一种含有39个氨基酸的活性多肽，氨基酸序列为：H₂N-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-COOH，是GLP-1的类似物，能够刺激胰岛β细胞再生，促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的释放，具有控制血糖功效，艾塞那肽注射液通过减少2型糖尿病患者空腹和餐后血糖浓度，从而改善血糖控制。

艾塞那肽的制备方法目前主要采用传统经典的固相多肽合成法，即将39个保护氨基酸从C端到N端依次逐个连接，最后切割得粗肽，纯化得纯品，此法合成效率低、产品含量低、纯化成本高；目前的片段缩合方法有固相液相混合使用，此法要求片段纯度较高，且液相反应过程中杂片段累积对产品含量影响大、过程较繁杂、纯化成本高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服传统经典的固相多肽合成法合成长肽效率低、产品含量低、纯化成本高的缺点，以及固相液相混合使用时过程较繁杂、纯化成本高的缺点，提供一种合成效率高、纯化成本低、易流程化、易规模化的全固相片段法合成艾塞那肽的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin

（1）合成Fmoc-Ser(tBu)-MBHA Resin

将Fmoc-Rink Amide MBHA Resin用N,N-二甲基甲酰胺溶胀后，用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc-Ser(tBu)-MBHA Resin。

（2）合成Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin

将Fmoc-Ser(tBu)-MBHA Resin用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Pro-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin。

（3）合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin

按照步骤（2）的方法向Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin上依次连接Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH，得到Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin。

2、合成Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-COOH

（1）合成Fmoc-Gly-2-CTC resin

将2-chlorotrityl chloride resin用二氯甲烷溶胀后，加入二氯甲烷、Fmoc-Gly-OH、N,N′-二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc-Gly-2-CTCresin。

（2）合成Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-2-CTC resin

按照步骤1中（2）的方法，向Fmoc-Gly-2-CTC resin上依次连接Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH，得到Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-2-CTC resin。

（3）切割处理