[发明专利]一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程抗体技术，特别是涉及一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体；本发明还涉及该抗体在制备预防或治疗乙肝病毒相关肝病药物中的应用。 

背景技术

乙肝病毒感染是世界范围内的一个主要的公共健康问题，急性乙型肝炎过后有5%－10%的持续HBV感染发展为慢性肝病包括慢性活动性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。据估计全世界每年有500,000到1,000，000人死于与HBV有关的各种肝脏疾病。我国是肝炎大国，乙肝病毒携带率为人口的9.75%。全世界乙肝病毒感染者4.2亿，我国约有1.3亿人携带乙肝病毒。乙肝病毒的传播方式大致可分为垂直传播和水平传播两大类。垂直传播指HBV携带者母亲对胎儿的传播，绝大部分发生在妊娠的最后三个月。婴儿一旦感染乙肝病毒，他们中85％－90％会发展成慢性带乙肝病毒状态，其中25％于成年后将死于肝硬化和肝癌。99年的研究显示，我国乙肝病毒感染者也就是乙肝病毒携带者和慢性乙型肝炎中有80%-85%来源于父母在生殖生育过程中的感染。水平传播可以概括为围产期传播、家庭内传播、医源性传播和性传播，而其中围产期传播较严重。 

关于慢性乙型肝炎的治疗目前还没有一个令人满意的方法，对于肝功能有损害的病人通过保肝治疗绝大部分可以使肝功能得到恢复，但要清除乙肝病毒却是十分困难的。乙肝病毒慢性携带者更是如此。其原因主要是免疫耐受，也就是乙型肝炎病毒感染者的体内免疫系统对乙型肝炎病毒不能产生有效的清除作用。免疫耐受的原因是人体感 染乙肝病毒的时间较早，普遍认为是在3岁以前感染的。 

在没有找到合适的治疗方法之前，阻止病毒感染就显得十分重要。目前对于乙肝病毒的预防有主动免疫和被动免疫两种。主动免疫即注射乙肝疫苗，自70年代末首次出现血源性乙肝疫苗，经过几十年的发展到现在已有了成熟的基因工程疫苗。乙肝疫苗的免疫效果好，是预防乙型肝炎传播的有效手段之一。被动免疫为注射乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG），主要用于阻断母婴传播（与乙肝疫苗联合使用）和意外事故的被动免疫。有研究表明采用乙肝疫苗联合HBIG阻断母婴传播效果优于单用疫苗者并且能减少慢性感染的比例。目前HBIG均来源于人抗－HbsAg的阳性血清，这就使其大量制备受到限制，同时由于来源于血清所以容易发生血源性传播疾病的感染。如同当初血源性疫苗向基因工程疫苗的转变，现在也急需用基因工程乙肝表面抗体替代血源性HBIG，嗜菌体抗体库技术为这一问题的解决另辟蹊径。 

含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白用以预防和治疗传染病已历史悠久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护肌体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如鼠抗甲肝病毒、汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、CMV病毒等中和性单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击。以抗原免疫动物获得多抗血清的途径一直是获得抗体的经典方法，但缺乏特异性和均一性。继而建立的B淋巴细胞杂交瘤技术使得众多科学家通过细胞工程可以在体外定向地制备各种单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），其特异性强，性质均一，易于大量生产。然而McAb多为鼠源性，鼠源McAb的异源性反应极大地限制了McAb作为治疗制剂在人体的应用。免疫球蛋白（Vaccinia immune globulin，VIG）作为抗体成分主要来自捐献者（恢复期病人）免疫血清，从获得阳性血清到通过安全性检测均需花费大量的人力和财力，这就使其大量制备受到限制，同时由于来源于血清所以容易发生血源性传播疾病的感染。因此使用人源基因工程产 品替代血制品则可克服这些缺陷，而人源基因工程抗体研究的不断深入，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和广阔前景。通过抗体分子基因水平的重组可获得多种多样的特异性鼠源及人源抗体，使对单克隆抗体的研究有了突破性进展并越来越显示出其重要意义及实际运用前景。