[发明专利]用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系及其测定方法

权利要求书

1.用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系，其特征在于，该重组细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC No.C2013133；其保藏命名为：携带P基因的斜纹夜蛾卵巢细胞系Sf9-p。

2.权利要求1所述的用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建报告质粒；所述报告质粒包括其中插入了编码绿色荧光蛋白的报告基因、诱导所述报告基因表达的所述杆状病毒的晚期基因的启动子P基因；

利用所述报告质粒转染Sf9昆虫细胞；

将转染后的所述Sf9昆虫细胞用含有博来霉素以及胎牛血清的培养基筛选，得到单细胞克隆；

将所述单细胞克隆继续用含有博来霉素的培养基筛选，得到重组细胞系。

3.根据权利要求2所述的用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系的构建方法，其特征在于，在所述利用所述报告质粒转染Sf9昆虫细胞的步骤中，

所述转染的时间为46-50小时。

4.根据权利要求2所述的用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系的构建方法，其特征在于，在所述将转染后的所述Sf9昆虫细胞用含有博来霉素以及胎牛血清的培养基筛选，得到单细胞克隆的步骤中，

所述培养基为：含有200ng/ml-800ng/ml的博来霉素以及体积分数为10%的胎牛血清的Grace培养基。

5.根据权利要求1所述的用于杆状病毒滴度测定的重组细胞系，其特征在于，在所述将所述单细胞克隆继续用含有博来霉素的培养基筛选，得到重组细胞系的步骤中，

所述博来霉素的浓度为200ng/ml-800ng/ml。

6.一种根据权利要求1所述的重组细胞系测定杆状病毒的滴度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将重组细胞系制成细胞悬液；

在待测的杆状病毒液中加入所述细胞悬液，恒温培养预定时间后通过观察荧光情况进行病毒滴度计算，得到滴度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述将重组细胞系制成细胞悬液的步骤中，具体包括：

用Grace培养液将所述重组细胞系稀释，得到浓度为2×10⁴个/ml到5×10⁴个/ml的所述细胞悬液。

8.权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述将重组细胞系制成细胞悬液的步骤中，

所述细胞悬液中加入有卡那霉素和/或链霉素。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述在待测的杆状病毒液中加入所述细胞悬液，恒温培养预定时间后通过观察荧光情况进行病毒滴度计算，得到滴度的步骤中，具体包括：

在所述待测的杆状病毒液中加入等量的细胞悬液，在27℃至28℃培养3-5天之后观察荧光情况进行病毒滴度计算，得到滴度。

10.根据权利要求6-9任一项所述的方法，其特征在于，所述杆状病毒液包括：

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒液。