[发明专利]提高L-精氨酸发酵产酸的工艺

权利要求书

1.一种提高L-精氨酸发酵产酸的工艺，其特征在于：采用黄色短杆菌ATCC21493（SD^R）为出发菌，经NTG处理，诱变得到TA189菌株，该菌株可以利用葡萄糖直接合成精氨酸；

具体工艺步骤如下：

菌种选育：从黄色短杆菌ATCC21493（SD^R）为出发菌，在选择性培养基中加一定浓度的AHV（α-氨基-β-羟基戊酸）或2-TA（α-噻唑丙氨酸），诱变得到TA174（SD^R、AHV^R、Z-TA^R）菌株；经过NTG处理得到TA188(SD^R、AHV^R、2-TA^R、L-His^-)菌株；把TA188再经过NTG处理后筛选出突变株TA189 (SD^R、AHV^R、2-TA^R、L-His^-)菌株，最后发酵产酸。

2.根据权利要求1所述的一种提高L-精氨酸发酵产酸的工艺，其特征在于：所述黄色短杆菌TA174的筛选：出发菌株：黄色短杆菌 ATCC214939（SD^R)

所述的菌种，筛选所用诱变培养基的组成为 ：

培养基

a、完全培养基：蛋白胨1.0%、牛肉膏1.0%、酵母膏0.5%、氯化钠0.5%、琼脂粉2.0%，PH7.0-7.2（试纸），灭菌温度121℃，灭菌时间20分钟；

b、选择抗性菌株的基本培养基：

葡萄糖1.0%、(NH₄)₂SO₄0.3%、KH₂PO₄0.1%、K₂HPO₄·3H₂O0.3%、MgSO₄·7H₂O0.05%、FeSO₄·7H₂O 0.002%、MnSO4·H₂O0.002%、V_H50μg/l、V_B1·HCl200μg/l，琼脂粉2.0%，PH6.8-7.0，121℃灭菌20分钟；

选择性培养基加一定浓度的AHV（α-氨基-β-羟基戊酸）或2-TA（α-噻唑丙氨酸）

c、种子培养基   葡萄糖3﹪、尿素0.25﹪、K₂HPO_4·3H₂O0.15﹪、 KH₂PO₄0.05﹪、 MgSO_4·7H₂O 0.04﹪、维生素H_H25ug/l、C.S.L2.5﹪，pH7.0-7.2。

3.115℃灭菌15分钟。

4.装液量20ml/250ml三角瓶或150ml/1000ml三角瓶；

发酵产酸：

d 、发酵培养基   葡萄糖12.5﹪、(NH₄)₂SO₄5-7﹪、 K₂HPO_4·3H₂O0.05﹪、 KH₂PO₄ 0.10﹪、MgSO_4·7H₂O0.05﹪、硫胺素盐酸盐100ug/l、C.S.L1.2﹪（分消）、CaCO₃5﹪（分消），pH7.0-7.2，装液量20ml/500ml三角瓶。

5.在摇瓶阶段每瓶加苯酚红2-4滴，115℃灭菌15分钟。

6.根据权利要求1所述的一种提高L-精氨酸发酵产酸的工艺，其特征在于：所述该菌的诱变方法及抗性菌检出：

取活化的培养基（1）斜面菌苔（30~33℃培养18~24小时），（φ15×150斜面试管4支）接入装30ml 1/30M磷酸缓冲液及玻璃珠的250ml三角瓶中振摇15min使菌体分散成单细胞，加入事先溶解的NTG使终浓度250~500ug/ml，30℃振摇处理30min后吸0.5ml入液体完全培养基（1）（25ml/250ml三角瓶）中30℃振荡培养至培养液微混（对数生长初期），不稀释涂布在选择性培养基平板上（每皿0.1~0.2ml），30℃培养3~5天，挑出大菌落即视为抗性菌。