[发明专利]异种角膜材料的制备方法

权利要求书

1.一种异种角膜材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）细胞失活：在已死亡动物体上获取可作为异种角膜材料的眼球，整个眼球转入溶液中密封保存，保存过程中逐渐降温，每分钟降温2-3℃，最终在-78℃的温度下进行长期保存，所述保存期限至少为4周，所述溶液包括甘油和缓冲溶液，其中甘油浓度为85～95%，缓冲溶液浓度为5～15%；

（2）灭病毒：将上述步骤（1）中已经经过密封保存的整个眼球转至-20℃的保温容器中，用γ射线进行辐照，辐照剂量为25kGy；

（3）交联：将上述步骤（2）中的整个眼球转至含有20～80%甘油的交联剂中，在4℃的温度下保存1～72小时；

（4）植片制作：将上述步骤（3）中的整个眼球沿眼球角膜缘后2毫米剪开，植片于角膜板层切削器中，切削器对角膜的切削厚度为200～550μm。

2.根据权利要求1所述的异种角膜材料的制备方法，其特征是：交联剂选自 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)，它们之间的质量比为1:1～3:1；EDC在溶液中最终浓度为1.0～10.0%。

3.根据权利要求1或2所述的异种角膜材料的制备方法，其特征是：眼球应是在动物死亡后四个小时内获取，对已获取的整个眼球在进行密封保存之前，应依次用浓度为2%的碘伏和浓度为0.9%的生理盐水来冲洗整个眼球，然后剪除眼球周围的筋膜肌肉，接着用浓度为2%的碘伏冲洗整个眼球，冲洗完后再用浓度为0.9%的生理盐水冲洗整个眼球。

4.根据权利要求3所述的异种角膜材料的制备方法，其特征是：在进行密封保存之前，还应该将整个眼球泡入含有40毫克妥布霉素的50%高糖溶液中，泡的时间为至少20分钟，20分钟后用浓度为0.9%的生理盐水对整个眼球进行冲洗。

5.根据权利要求1或2所述的异种角膜材料的制备方法，其特征是：在沿眼球角膜缘后2毫米剪开之前，应该将整个眼球放于林格氏液中清洗2次，每次5分钟。