[发明专利]一种石油降解菌固定化包埋颗粒的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种石油降解菌固定化包埋颗粒的制备方法，包括以下内容：（1）将35.8wt%~46.5wt%的水葫芦、14.2wt%~18.5wt%的小麦秸秆粉碎过筛，与35wt%~50wt%的核桃壳质活性炭混合，作为辅助载体；（2）取占包埋体系3.0wt%~7.0wt%的辅助载体，接入10wt%~20wt%的石油降解菌种子液，进行吸附；（3）将占包埋体系8.0wt%~10wt%的聚乙烯醇搅拌溶解于80~100℃水中，加入1.2wt%~1.5wt%的海藻酸钠混匀，冷却后加入余量的水；（4）将（2）和（3）混匀组成包埋体系，滴入CaCl₂溶液中交联成球，再转入Na₂SO₄溶液中固定化，获得石油降解菌固定化包埋颗粒。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的辅助载体进行预处理，先用蒸馏水浸泡12~24h，调节pH7.0~7.2，滤去上层杂质，再将滤出的混合物50℃干燥24h，121℃高压蒸汽灭菌20min。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的水葫芦全碳含量为220g/kg~260g/kg，全氮含量为38.5g/kg~45.5g/kg，全磷含量为9 g/kg~10.8 g/kg。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的小麦秸秆的全碳含量为28.1g/kg~35.6g/kg，全氮含量为32.9g/kg ~46.8g/kg，全磷含量为0.64 g/kg ~0.83 g/kg。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的核桃壳质活性炭为粉末活性炭，比表面积为960m²/g，碘吸附值为820mg/g。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述的石油降解菌种子液的制备采用牛肉膏蛋白胨液体培养基，在120r/min、30℃条件下培养至对数生长期与稳定期的交界点，保证石油降解菌的数量达到1×10¹⁰~5×10¹⁰个/mL。

7.按照权利要求1或6所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述的石油降解菌的吸附是在120~160r/min、30℃条件下培养吸附16~24h，使石油降解菌吸附在辅助载体上，保证吸附的菌量达到9×10⁹~4.6×10¹⁰个/mL。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）的CaCl₂溶液的浓度为1wt%~5wt%，Na₂SO₄溶液的浓度为10wt%。

9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）交联成球后，将微球取出用生理盐水洗涤；再放入Na₂SO₄溶液中，搅拌反应2~4h，再用生理盐水洗涤。

10.按照权利要求1至9任一所述的方法制备的石油降解菌固定化包埋颗粒的应用，其特征在于：将制备的石油降解菌固定化包埋颗粒在无菌条件下按10wt%~20wt%的比例接入增殖培养基中，120 ~160r/min、30℃条件下恒温培养24h，然后滤掉培养基，以播种的方式对50~100g/kg油污土壤按每平方米撒0.1~1kg石油降解菌固定化包埋颗粒，保持土壤30wt%~40wt%的水分含量，并对表层0~30cm土壤进行翻耕。