[发明专利]硝酸盐同化细菌及其在修复设施次生盐渍化土壤中的应用

权利要求书

1.一种硝酸盐同化细菌NCT-2的量产方法，其特征在于，包括：保藏、活化和扩大培养，其中：

菌种保藏：采用-80℃低温冷冻保藏，将硝酸盐同化细菌NCT-2处于冷冻状态，以降低其代谢作用以达到保藏目的；

菌种活化：将冷冻保藏下的硝酸盐同化细菌NCT-2放入马铃薯培养基中振荡培养，直至获得数量足够、活力旺盛的培养物(OD₆₀₀为1.5-2.0)；

菌种扩大培养：将活化后的培养物接种到马铃薯培养基中，于28℃、150rpm摇床环境下培养两天；

所述的硝酸盐同化细菌NCT-2为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，该硝酸盐同化细菌NCT-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.4698。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的硝酸盐同化细菌NCT-2的稳定单菌落通过从土壤中采集样品，经过多次驯化后，再在固体培养基接种并培养获得。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的土壤取自上海市崇明岛设施栽培12-15年的大棚。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的多次是指：每次驯化周期为7天，驯化后以10%接种量重新接入液体培养基中，反复驯化4次。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的驯化是指：将土壤样品接种于液体培养基中，于25℃、120rpm条件下培养7天。

6.根据权利要求2或4或5所述的方法，其特征是，所述的培养基为无机盐液体培养基。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的无机盐液体培养基的组分及含量为：

葡萄糖15g/L，KCl1.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，CaCl₂0.001g/L，FeSO₄·7H₂O0.1g/L，KH₂PO₄0.5g/L，余量为超纯水，pH为6.8-7.2。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的接种为：取100μL驯化的菌悬液涂布于无机盐固体培养基中，于25℃恒温恒湿培养箱中倒置培养2d，待菌落长出，挑取菌落于无机盐固体培养基上划线，直至获得单菌落；再将获得的单菌落，在以硝态氮为唯一氮源的无机盐固体培养基上连续传代6次，直至获得形态稳定的纯培养。

9.根据权利要求2或8所述的方法，其特征是，其特征是，所述的固体培养基为无机盐液体培养基中再加入15-18g/L琼脂即得。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的马铃薯培养基通过以下方式制备得到：称取去皮马铃薯200g，煮沸20min后过滤得浸汁，加入蔗糖20g，补超纯水至体积为1L；然后调节pH为7.0-7.2，最后加热至121℃环境下灭菌20min。