[发明专利]猪传染性胃肠炎核酸疫苗及其免疫增强剂和制备方法无效
| 申请号： | 201310505297.2 | 申请日： | 2013-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN103784969A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 任晓峰;李训良;李鹏冲 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K39/225;A61K39/39;A61P1/00;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150030 黑龙江省哈尔滨市*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 传染性 胃肠炎 核酸 疫苗 及其 免疫 增强 制备 方法 | ||
1.一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗pVAX-TGEV S1，其特征在于，序列如序列表SeqNo.1所示。
2.一种对猪传染性胃肠炎核酸疫苗的免疫增强剂pVAX-pIL12p(40)-linker-pIL12p(35)，其特征在于，序列如序列表Seq No.2所示。
3.根据权利要求1所述一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗，用于扩增猪传染性胃肠炎病毒TGEV S1的引物对，其特征在于，上引物P1：如序列表Seq No.3所示，下引物P2：如序列表Seq No.4所示。
4.根据权利要求2所述一种对猪传染性胃肠炎核酸疫苗的免疫增强剂pVAX-pIL12p(40)-linker-pIL12p(35)，用于扩增pIL12p(40)的引物对，其特征在于，上引物P3：如序列表Seq No.5所示，下引物P4：如序列表Seq No.6所示；用于扩增pIL12p(35)的引物对，其特征在于，上引物P5：如序列表Seq No.7所示，下引物P6：如序列表Seq No.8所示。
5.一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗pVAX-TGEV S1的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)根据质粒PMD-18-T-TGEV-S基因的核苷酸序列设计引物对，上引物P1，序列如序列表Seq No.3所示，下引物P2，如序列表Seq No.4所示；
(2)进行常规链式聚合酶反应扩增TGEV S1基因；
(3)构建重组质粒pVAX-TGEV S1。
6.根据权利要求5所述的一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗pVAX-TGEV S1的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)采用常规链式聚合酶反应扩增TGEV S1基因的具体步骤如下：将混合液在95℃5min预变性；然后94℃1min；45.7℃1min；72℃2min；30个循环，最后72℃10min。
所述混合液组成如下：
。
7.根据权利要求5所述的一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗pVAX-TGEV S1的构建方法，其特征在于：所述的步骤(3)重组质pVAX-TGEV S1的构建方法具体步骤如下：先将PCR产物TGEV S1基因经HindIII和EcoR I酶切，利用胶回收试剂盒回收纯化目的基因片段，将纯化后的目的基因克隆入表达载体pVAX1的HindIII和EcoR I位点，将鉴定正确的重组质粒命名为pVAX-TGEV S1。
8.一种对猪传染性胃肠炎核酸疫苗的免疫增强剂pVAX-pIL12p(40)-linker-pIL12p(35)的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)根据质粒PUC-18-IL-12(p40)及PUC-18-IL-12(p35)的核苷酸序列分别设计引物对，上引物P3，序列如序列表Seq No.5所示，下引物P4，如序列表Seq No.6所示；上引物P5，序列如序列表SeqNo.7所示，下引物P6，如序列表Seq No.8所示；
(2)进行常规链式聚合酶反应扩增pIL12p(40)-linker-pIL12p(35)基因；
(3)构建重组质粒pVAX-pIL12p(40)-linker-pIL12p(35)。
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