[发明专利]一种威兰胶的发酵方法

权利要求书

1.一种威兰胶的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将淀粉或纤维素类原料进行预处理和酶水解，得到水解糖液；

步骤二，以步骤一得到的水解糖液为碳源，并加入氮源、无机盐和表面活性剂，制得发酵培养基；

步骤三，将保藏的威兰胶生产菌株接种到种子培养基中，于28～32℃培养14～16h，得到种子液；

步骤四，将步骤三得到的种子液接种到步骤二得到的发酵培养基中发酵，得到发酵液；

步骤五，将步骤四得到的发酵液经提取、干燥、粉碎和过筛，得到所述威兰胶。

2.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤一中所述的纤维素类原料包括玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆、玉米芯或甘蔗渣中的一种；所述的淀粉类原料包括玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉中的一种；所述的水解糖液中包含有1～6%质量浓度的葡萄糖。

3.根据权利要求2所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，所述的水解糖液中包含有3～4%质量浓度的葡萄糖。

4.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤二中所述的氮源为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、(NH₄)₂SO₄和(NH₄)₂HPO₄中的一种以上；所得的发酵培养基中氮源的质量浓度为0.3～0.5%；所述无机盐为K₂HPO₄、KH₂PO₄或MgSO₄，所得的发酵培养基中无机盐的质量浓度为0.01～0.3%；发酵培养基初始pH值为6～8。

5.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤二中所述的表面活性剂为吐温-80、十二烷基磺酸钠和脂肪酸甘油酯中的一种以上，所得的发酵培养基中表面活性剂的质量浓度为0.5‰～1‰。

6.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤三中所述的威兰胶生产菌株为产碱杆菌ATCC31555；所述种子培养基包括：1%质量浓度的葡萄糖、1%质量浓度的蛋白胨、0.5%质量浓度的酵母粉、0.2%质量浓度的K₂HPO₄和0.01%质量浓度的MgSO₄，所述种子培养基初始pH值为6～8。

7.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤四所述的威兰胶发酵具体步骤为：将步骤三得到的种子液按3～10%(v/v)接种到发酵培养基中，在28～30℃、罐压0.01～0.15MPa、通气量1.0～1.25vvm和pH值6.5～7.5的条件下发酵72h，发酵过程分以下四个阶段进行：

第一阶段为0～4h，在250～400r/min的搅拌速度下发酵；

第二阶段为4～24h，在400～600r/min的搅拌速度下发酵；

第三阶段为24～44h，在400～600r/min的搅拌速度下发酵，并加入初始发酵体积5～6%的补料培养基；

第四阶段为44～72h，在250～400r/min的搅拌速度下发酵。

8.根据权利要求7所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，所述补料培养基为步骤一所得的水解糖液的浓缩液、淀粉水解液或葡萄糖溶液，补料培养基中葡萄糖质量浓度为15～20%。

9.根据权利要求1所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤五的具体步骤如下：

（a）提取：将步骤四得到的发酵液过滤除去菌体，取滤液，然后加入体积为滤液体积1.5～2倍的有机溶剂进行提取，取沉淀物；

（b）干燥：将步骤（a）得到的沉淀物于60℃干燥，得到威兰胶粗品；

（c）粉碎过筛：将步骤（b）得到的威兰胶粗品粉碎，然后过60～120目筛，得到所述威兰胶。

10.根据权利要求9所述的威兰胶的发酵方法，其特征在于，步骤（a）所述的有机溶剂为乙醇、甲醇或异丙醇中的一种以上。