[发明专利]Miller-Dieker综合征检测芯片

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域的基因芯片，更具体的，本发明是一种检测Miller-Dieker综合征的基因芯片。

背景技术

Miller-Dieker综合征(敏-迪综合症，MDS)是一种以无脑回和特殊面容为特征的复杂综合症。本病是由于17p13.3处多个基因微缺失或点突变引起神经原迁移障碍、导致大脑皮层发育异常造成的。本病发病率约为1.2/10万。主要临床表现为先天性无脑回、严重智力障碍；特殊的短头畸形、前额突出、双颞凹陷、鼻孔朝前的矮鼻子、面部扁平、宽厚的上嘴唇和薄唇缘、小颌等。

MDS绝大多数为散发，少数为家族性遗传，约90％的患者发现染色体17p13.3区域发生约350kb大小的微小缺失，其父母为17p13.3平衡易位携带者的可能性为20％，平衡易位携带者生育患者的可能性为33％。

目前常见的检测手段为FISH，必要的辅助检查包括头颅CT或MRI、智商测定等。FISH可作为临床诊断依据，检出率约为90％。然而尚无一种快速、低成本、大通量和自动化检测Miller-Dieker综合征基因突变的方法。

比较基因组杂交(CGH)芯片分析技术是一种突破性技术，能够支持研究人员通过微阵列准确研究与疾病有关的染色体的变化。比较基因组杂交(CGH)芯片分析的原理是在一张芯片上用两份标记不同荧光素的样品(检测样品和对照样品)同时进行杂交，从而快速而又直观地检测实验样品和对照样品之间基因组DNA的拷贝数量的差异。CGH应用于疾病遗传学的研究，可以提供一个全基因组的扫描图，提示样本DNA在整个染色体组的哪个特定位置存在扩增或缺失，那些发生扩增的区域，极有可能存在致病基因，而缺失区域即可能包含一些抑制基因。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测Miller-Dieker综合征的基因芯片。本发明的诊断芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，时间短，成本低。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明涉及一种检测Miller-Dieker综合征的基因芯片，包括片基以及固定在片基上的探针，其中探针为SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列。

所述片基为载玻片、硅片、膜、高分子材料中的一种。

本发明具有如下的有益效果：本发明的诊断芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，该芯片多次试验重复性高；时间短，从样本抽提到得到扫描结果可在一个工作日内完成。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解为：这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册见New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

步骤一，样品准备

将水浴锅温度调到37℃和65℃，溶化10X Buffer C，短暂涡旋震荡后离心数秒。

对每个反应来说，将gDNA加入到适当的无核酸酶的PCR管中，并加入无核酸酶的水使反应体积达到10.1μL。

在冰上准备酶切混合母液(Digestion Master Mix)，按顺序加入以下试剂：

将2.9μL酶切反应液加入到gDNA反应管中，使之体积达到13μL。上下颠倒使之混匀。进行PCR反应，反应程序为：37℃运行2小时，65℃运行20分钟。反应后将反应管转移到冰上，取2μL酶切好的gDNA，配置0.8％琼脂糖胶，用SYBR Gold染色，跑电泳检测酶切是否完全。大部分酶切产物长度应在200bp-500bp。

步骤二，DNA的荧光标记

在每个反应管中加入2.5μL随机引物(Random Primers)，使之体积达到13.5μL，轻轻上下颠倒进行混匀。进行PCR反应，反应程序为：95℃变性3分钟。将反应管转移至冰上5min。

准备标记混合母液(Labeling Master Mix)，按顺序加入以下试剂：