[发明专利]一种检测赭曲霉毒素A的方法

权利要求书

1.一种检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，利用固定在光子晶体微球上的核酸适配体序列与其荧光标记互补序列进行杂交，通过加入待测样品，利用芯片扫描仪对加入样品前后的荧光信号进行检测；根据测得的荧光信号的变化值对样品中的赭曲霉毒素A进行检测；

所述核酸适配体序列是：5′-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-NH₂-3′；

荧光标记互补序列是5′-FITC-TGT CCG ATG CTC CCT TTA CGC CAC CCA CAC CCG ATC-3′。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，预先建立荧光信号的变化值与赭曲霉毒素A标准溶液浓度的关系作为定量分析指标，再根据测得的荧光信号的变化值对样品中的赭曲霉毒素A进行定量。

3.根据权利要求1所述的方法，包括以下步骤：

（1）光子晶体微球的制备；

（2）光子晶体微球表面功能化：通过体积比3：7的双氧水与浓硫酸对步骤（1）得到的微球表面进行清洗及羟基化修饰，再用γ-缩水甘油氧丙基三甲氧基硅烷对微球表面进行环氧基修饰；

（3）DNA固定与杂交：通过化学键合方法将赭曲霉毒素A的核酸适配体序列5′-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-NH₂-3′固定于经过步骤（2）表面修饰的微球表面，再与其荧光互补序列5′-FITC-TGT CCG ATG CTC CCT TTA CGC CAC CCA CAC CCG ATC-3′进行杂交结合；

（4）用经步骤（3）处理的单珠光子晶体微球分别加入不同浓度有赭曲霉毒素A标准溶液，利用芯片扫描仪检测加入赭曲霉毒素A标准溶液前、后的荧光信号值，加入前所获得的荧光信号为I₀，加入之后的荧光强度为I，△I=I₀-I，建立△I与赭曲霉毒素A标准溶液的关系，作为定量分析指标；

（5）用单珠光子晶体微球对待测样品进行检测；利用芯片扫描仪检测荧光信号值，根据测得的荧光信号的变化值，依据步骤（4）建立的定量分析指标对样品中的赭曲霉毒素A进行定量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤（2）中γ-缩水甘油氧丙基三甲氧基硅烷对微球表面进行环氧基修饰时，110℃下烘干30min。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述赭曲霉毒素A的核酸适配体序列的包被浓度为400ng/mL，其互补序列浓度为500ng/mL。