[发明专利]一种羔羊痢疾B型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种羔羊痢疾B型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)B型产气荚膜梭菌菌种接种于血平板培养基上在厌氧环境下37℃46h复苏；

2）复苏后的B型产气荚膜梭菌接种在硫乙醇酸盐流体培养基中，在厌氧环境下38℃14h培养增菌；

3)将步骤2）增菌培养物按照接种量8%体积比接种产毒培养基，在厌氧环境下振荡培养，38℃培养5h，然后在4℃3800g离心15min，蔡氏滤器过滤除菌,得到外毒素溶液；

4）在外毒素溶液中加入外毒素溶液体积比为0.3%的甲醛，充分振荡混匀，置37℃48h灭活，间隔5-6h振摇一次，得到灭活好的类毒素溶液；

5）在类毒素溶液中按1:1体积比加入灭菌的白油佐剂乳化，每100毫升乳化液中加入0.01克硫柳汞制得B型产气荚膜梭菌类毒素疫苗；

所述白油佐剂构成：9份白油和一份Span-80混合后加入白油和Span-80混合液体积比2%的Tween-20和质量比1%的硬脂酸铝；

所述的血平板培养基成分为：100毫升蒸馏水、3.7g豆粉琼脂、1g葡萄糖和5%体积比绵羊血；

所述的产毒培养基成分为：每100mlPBS缓冲液溶解2g胰蛋白胨、1g糊精、2g酵母浸膏和1.2gL-精氨酸；

所述的PBS缓冲液成分为：1L去离子水、8g NaCl、0.2g KCl、3.58g Na₂HPO₄·12H₂O、0.27g KH₂PO₄。