[发明专利]冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基及其发酵生产方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基，其特征在于用于母种制备的固体培养基配方如下：各成分重量比例为1.50-4.00%碳源,碳源为葡萄糖或蔗糖或麦芽糖，0.50-2.00%氮源，氮源为酵母膏或牛肉膏或蛋白胨，0.05-0.15%硫酸镁，0.10-0.20%磷酸二氢钾，0.05-0.10%复合维生素，1.00-2.00%琼脂粉，其余为水分；

将上述物料加热至100℃，使物料溶解、混匀，121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却降至室温凝固后即可使用。

用于摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养的液体培养基成分一致，培养基配方如下：各成分重量比例为2.00-6.00%碳源，碳源为葡萄糖或蔗糖或麦芽糖，1.00-3.00%氮源，氮源为酵母膏或牛肉膏或蛋白胨，0.08-0.20%复合维生素，其余为水分；

将上述物料加热至100℃，使物料溶解、混匀，121℃下0.15MPa压力下灭菌30-50分钟，冷却降至室温即可使用。

2.根据权利要求1所述的冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基，其特征在于复合维生素由维生素B1、维生素B2、核黄素组成，重量比例为1:1:1或2:2:1。

3.一种利用权利要求1所述冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基的发酵生产方法，其特征在于：

（1）母种制作：从冬虫夏草产区采收新鲜冬虫夏草，从虫子致密组织上取直径0.5-1cm的组织分离新菌种到固体培养基中，培养25-30天得母种；

（2）摇瓶培养：用接种针将母种接种到摇瓶中的液体培养基中，摇床转速100-200rpm，培养8-10天，菌丝体浓度为30%，准备上种子罐；

（3）种子罐培养：按照2-5%的接种量将摇瓶培养的液体菌种接种到种子罐中的液体培养基中，种子罐搅拌速度100-180rpm，罐压0.05-0.10Mpa，空气流量0.60-1.80L/min，培养6-8天得种子罐液体菌种，准备上发酵罐；

（4）发酵罐培养：按照4-10%的接种量把摇瓶培养的液体菌种接种到发酵罐中的液体培养基中，搅拌速度100-250rpm，罐压0.05-0.20Mpa，空气流量0.80-2.00L/min，培养8-10天得发酵产物。

4.根据权利要求3所述的虫夏草规模化液体深层发酵发酵用培养基的发酵生产方法，其特征在于：在摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养的菌种接入培养基中，pH值为5.0-8.0，温度为10-20℃。

5.根据权利要求3所述的虫夏草规模化液体深层发酵发酵用培养基的发酵生产方法，其特征在于：其应用于种子罐培养和发酵罐培养过程中，根据不同阶段冬虫夏草生长要求的差别，前期、中期、后期采用不同的搅拌速度、罐压和空气流量。