[发明专利]一种提高乌司他丁收率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及从尿液中分离乌司他丁的方法。 

背景技术

乌司他丁(Ulinastatin)系从健康成年性新鲜尿液中分离纯化出来的一种酸性糖蛋白，是一种广谱的蛋白酶抑制剂，主要在肝脏中合成，由肾脏代谢随尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。乌司他丁由143个氨基酸组成，相对分子质量约37000-43000，属于蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用，还具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子(MDF)产生、清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。乌司他丁还可改善手术刺激引起的免疫功能下降、蛋白代谢异常和肾功能降低，防止手术刺激引起的对内脏器官与细胞的损伤以及改善休克时的循环状态等。 

1909年欧洲首先报道人体尿液存在着胰蛋白酶抑制剂，随后人们发现，当人体受到感染、发热、肿瘤、妊娠、休克、手术、给予糖皮质激素等刺激时，人体尿液中UTI活性升高。1985年由日本首先开发上市，在日本已作为急性胰腺炎、急性循环衰竭的治疗药物被广泛应用于临床。 

我公司自2008年开始对UTI的生产工艺进行试验研究，采用甲壳质吸附等现代蛋白质高端生化分离技术进行生产，使UTI的收率大幅提高，生产工艺稳定，质量可控。 

发明内容

本发明提供了一种提高乌司他丁收率的方法研究，是为了攻克甲壳质吸附法从尿中提取乌司他丁，乌司他丁收率过低，，效价不高不稳定的缺点，利用乌司他丁是一种糖蛋白，蛋白质在等电点溶解度最低的性质，在甲壳质吸附过程中，调尿液PH值至乌司他丁等电点，使乌司他丁易于沉淀析出。从而提高了乌司他丁收率，保证了效价的稳定性。 

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现： 

一种提高乌司他丁收率的方法研究，其特征在于：尿液中加入甲壳质，调节到PH5.5～6.0，使其吸附完全。 

在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：所述甲壳质等电点吸附法包括如下步骤： 

1)尿液检查 

1.1)尿液应当澄清； 

1.2)尿液的pH值应当在6.5以下。 

2)吸附工序： 

2.1)取合格尿1.0T用二层纱布过滤，滤入塑料桶中； 

2.2)在不断搅拌的同时，加入14～20kg甲壳质，调节尿液pH到5.5～6.0之间； 

2.3)搅拌吸附2小时，弃去尿液，用水洗涤甲壳质去残尿及杂质，至澄清为止。 

3)脱附工序： 

用5％氨水30～35L搅拌洗脱1小时，抽滤，收集洗脱液，甲壳质再用同量的5％的氨水溶液洗脱1小时，收集洗脱液，合并二次洗脱液。 

4)盐析工序： 

4.1)洗脱液中加入固体硫酸铵3～5kg，搅拌溶解，放置过夜沉淀，离心，收集沉淀的乌司他丁盐析品； 

4.2)将乌司他丁盐析品，置于用五氧化二磷作干燥剂的真空干燥器中真空干燥，干燥后即得乌司他丁。 

一种提高乌司他丁收率的方法研究，其特征在于：尿液中加入甲壳质，调节到PH5.5～6.0，使其吸附完全。 

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是： 

本发明的甲壳质吸附法从尿液中提取乌司他丁，通过调尿液PH至乌司他丁等电点，使其易于沉淀析出。使乌司他丁产品收率提高到0.017％以上。 

具体实施方式

实施例 

1尿液检查： 

1.1尿液澄清； 

1.2尿液的pH值在6.0 

2吸附工序： 

2.1取合格尿1.0T用二层纱布过滤，滤入塑料桶中； 

2.2在不断搅拌的同时，加入16.5kg甲壳质，调节尿液pH到6.0； 

2.3搅拌吸附2小时，弃去尿液，用水洗涤甲壳质去残尿及杂质，至澄清为止。 

3脱附工序： 

用5％氨水33L搅拌洗脱1小时，抽滤，收集洗脱液，甲壳质再用同量的5％的氨水溶液洗脱1小时，收集洗脱液，合并二次洗脱液。 

4盐析工序： 

4.1洗脱液中加入固体硫酸铵3.5kg，搅拌溶解，放置过夜沉淀，离心，收集沉淀的乌司他丁盐析品； 

4.2将乌司他丁盐析品，置于用五氧化二磷作干燥剂的真空干燥器中真空干燥，干燥后即得乌司他丁。 

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。