[发明专利]一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属反转录病毒的一种，是至今无有效疗法的致命性传染病，广泛存在于感染者的血液、精液、阴道分泌物、唾液、尿液、乳汁、脑脊液和有神经症状的脑组织液中。人类免疫缺陷病毒会破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症在人体内生存，发展到最后导致艾滋病。

对于艾滋病来说，早期确诊有利于病人尽快得到治疗，也利于控制疾病的传播，因此尽快诊断尤为重要。目前对艾滋病的检测分为血液检测和无创检测，通过检测结果是阴性还是阳性来判断是否得病。血液检测要刺破受检者的皮肤采集血样，这种创伤型检查会给病人带来痛苦，也会增加医务人员被感染的危险。无创检测是分析收集到的口腔液体得到诊断结果，但此方法费时费力，需要长时间的等待结果。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法，该方法制的的试纸检测准确，对人体无害。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法，包括步骤为：（1）将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到金标重悬液，用0.01M磷酸二氢钠溶液调节0.01M磷酸氢二钠溶液的pH值至7-8，得到包被缓冲液；

（2）往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH，加入待标记物并搅拌，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用所述金标重悬液重悬至离心前体积的1/10，其中所述待标记物为P74重组抗原、P44重组抗原或兔IgG单抗，得到P74重组抗原标记、P44重组抗原标记或兔IgG单抗标记；

（3）用包被缓冲液稀释P57重组抗原和P36重组抗原混合物得到检测线包被液，用包被缓冲液稀释羊抗兔IgG多抗稀释得到对照线包被液；

（4）通过点膜喷金设备用所述P74重组抗原标记和所述P44重组抗原标记的混合液对金垫喷金得到第一金垫，用所述兔IgG单抗标记对金垫喷金得到第二金垫，用所述检测线包被液和所述对照线包被液分别在粘有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；

（5）将样品垫、第一金垫、第二金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容总体积的比例为0.24g：20g：5g：1g：100mL。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述金标重悬液的pH值用1M盐酸调节至8.5，所述包被缓冲液的pH值调节至7.4。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述胶体金是过滤过的，所述搅拌是置于磁力搅拌器上，往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH并搅拌5min，加入待标记物并搅拌60min，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，搅拌30min，在4℃、转速为11000r/min的条件下离心60分钟，沉淀用所述金标重悬液重悬至离心前体积的1/10，得到标记物。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述0.2M碳酸钾和所述P74重组抗原的比例为9.5uL/mL:16μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述P44重组抗原的比例为9.5uL/mL:8μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述兔IgG单抗的比例为8uL/mL:10μg/mL，所述牛血清白蛋白的加入量占总体积的1%。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（3）中所述检测线包被液中所述P57重组抗原的浓度为1.6mg/mL，所述P36重组抗原的浓度为1.6mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗兔IgG多抗的浓度为2mg/mL。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（4）中所述金垫采用玻璃纤维膜，在喷金前用金垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述金垫处理液是十二烷基聚乙二醇醚加入水中定容得到，所述十二烷基聚乙二醇醚和定容总体积的比例为1g：100mL。