[发明专利]一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法

权利要求书

1.一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到金标重悬液，用0.01M磷酸二氢钠溶液调节0.01M磷酸氢二钠溶液的pH值至7-8，得到包被缓冲液；

（2）往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH，加入待标记物并搅拌，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用所述金标重悬液重悬至离心前体积的1/10，其中所述待标记物为P74重组抗原、P44重组抗原或兔IgG单抗，得到P74重组抗原标记、P44重组抗原标记或兔IgG单抗标记；

（3）用包被缓冲液稀释P57重组抗原和P36重组抗原混合物得到检测线包被液，用包被缓冲液稀释羊抗兔IgG多抗稀释得到对照线包被液；

（4）通过点膜喷金设备用所述P74重组抗原标记和所述P44重组抗原标记的混合液对金垫喷金得到第一金垫，用所述兔IgG单抗标记对金垫喷金得到第二金垫，用所述检测线包被液和所述对照线包被液分别在粘有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；

（5）将样品垫、第一金垫、第二金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容总体积的比例为0.24g：20g：5g：1g：100mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述金标重悬液的pH值用1M盐酸调节至8.5，所述包被缓冲液的pH值调节至7.4。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述胶体金是过滤过的，所述搅拌是置于磁力搅拌器上，往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH并搅拌5min，加入待标记物并搅拌60min，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，搅拌30min，在4℃、转速为11000r/min的条件下离心60分钟，沉淀用所述金标重悬液重悬至离心前体积的1/10，得到标记物。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述0.2M碳酸钾和所述P74重组抗原的比例为9.5uL/mL:16μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述P44重组抗原的比例为9.5uL/mL:8μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述兔IgG单抗的比例为8uL/mL:10μg/mL，所述牛血清白蛋白的加入量占总体积的1%。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述检测线包被液中所述P57重组抗原的浓度为1.6mg/mL，所述P36重组抗原的浓度为2.4mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗兔IgG多抗的浓度为2mg/mL。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述金垫采用玻璃纤维膜，在喷金前用金垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述金垫处理液是十二烷基聚乙二醇醚加入水中定容得到，所述十二烷基聚乙二醇醚和定容总体积的比例为1g：100mL。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述样品垫采用玻璃纤维膜，在使用前用样品垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述样品垫处理液是将比例为0.2g：6.06g：1.15g：0.1g：1.25g：1g:  10g的磷酸二氢钾、三羟甲基氨基甲烷、磷酸氢二钠、硫柳汞、十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸和牛血清白蛋白溶于水中定容到1L体积。