[发明专利]含血液成分的试样的处理方法

说明书

技术领域

本公开涉及含血液的试样的处理方法、分离含血液的试样中的稀少细胞以及核酸的方法、CTC数测定方法、以及试剂盒。

背景技术

血液的细胞成分为红细胞、白细胞、血小板，但是血液中也稀少地存在除此以外的细胞。作为其中一个例子，可以举出血中循环肿瘤细胞/CTC（Circulating Tumor Cell）。认为癌的转移是由于癌细胞通过血管、淋巴管运送到体内的其他部位并增殖而引起的。并且，报告了血液中的CTC数与癌的转移的可能性以及预后是相关的，并且已知为了作为癌（尤其是乳癌等转移性癌）的诊断、预后诊断、以及治疗效果的预测或判定的指标，而测定血液中的CTC数的计数、CTC的核酸（Circulating Tumor cell；Evolving Evidence and Future Challenges.The oncologist2009；14；1070-1082）。

作为血液中的CTC的分离、检测技术，有如下方法：通过针对CTC特异性表面抗原的抗体来捕捉分离血液中的CTC的方法（特许3834326号、特开2007-178193）、利用了粘附的分离方法（WO2005/043121、WO2006/078994）、利用密度梯度的分离方法（特开2010―075073、WO95/20429）、利用过滤器的分离方法（WO2006/116327、WO2008/155398）、测定CTC的端粒酶活性的方法（WO2010/071114）、通过使用了低渗溶液的溶血的分离方法（WO2004/056978）、利用了流式细胞仪的方法（WO2008/057437）等。为了检测、定量、计数用上述分离的物质，进行PCR、利用了有亲和性的物质的核酸的测定，另外，进行组合了抗体、荧光染料的光学CTC的测定是一般的。

发明内容

发明要解决的问题

为了在含血液成分的试样中的稀少细胞活着的情况下分析，或者分离并培养，需要在不对所述稀少细胞产生大的损坏的情况下，高效地去除血液中的细胞成分（尤其是红细胞及白细胞）。

因此，本公开提供一种抑制对含血液成分的试样中的血细胞以外的细胞的损坏、并可迅速排除血细胞的简便的处理方法。另外，提供一种通过去除血细胞等来提高CTC的纯度从而可抑制CTC的计数、核酸测定时的噪声、并可进行CTC的检测的简便的处理方法、或者分离或检测方法。

用于解决问题的手段

本公开在一个方式中，涉及一种含血液成分的试样的处理方法，包括混合含血液成分的试样与含有表面活性剂A的液体，不使用固定剂，所述表面活性剂A为下述通式（I）表示的非离子性表面活性剂。

R¹-O-（EO）n-R²   （I）

[所述式（I）中，R¹为具有分支链的碳数为12～40的烃基，EO表示氧乙烯基，n为EO的平均附加摩尔数，为23～50，R²为氢原子或碳数为1～3的烃基。]

本公开在又一方式中，涉及一种含血液成分的试样的处理方法，包括：混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A及表面活性剂B的液体、或含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为下述通式（I）表示的非离子性表面活性剂，所述表面活性剂B对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性。

R¹-O-（EO）n-R²   （I）

[所述式（I）中，R¹为具有分支链的碳数为12～40的烃基，EO表示氧乙烯基，n为EO的平均附加摩尔数，为23～50，R²为氢原子或碳数为1～3的烃基。]

本公开在又一方式中，涉及一种含血液成分的试样的处理方法，包括：混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A及表面活性剂B的液体、或含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为聚氧乙烯辛基十二烷基醚（EO=23～50），所述表面活性剂B为对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性的非离子性表面活性剂，并且为从聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚（EO=8～22）、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、以及它们的组合所组成的组中选择的非离子性表面活性剂。