[发明专利]应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法

权利要求书

1.应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）种细胞的培养：用细胞生长液对种细胞进行培养；

2）繁殖病毒用细胞的悬浮培养：将步骤1）培养得到的种细胞悬浮液接种至灌注袋中，吸附后在生物反应器中加入细胞生长液进行悬浮培养；

3）病毒的培养与收获：将小鹅瘟病毒悬液接种于生物反应器中，换用维持液进行培养，接毒后实时监测糖耗情况，当糖耗接近0时，即开始收获病毒，收获病毒后，反复冻融灌注袋，收获全悬病毒液，经检验合格后置于-20℃保存。

2.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤1）中种细胞为鹅胚成纤维传代细胞系CGBQ。

3.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤1）中种细胞采用方瓶培养法、转瓶培养法或微型反应器培养法进行培养。

4.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤2）中生物反应器为激流灌注式生物反应器、搅拌式生物反应器或潮汐式生物反应器。

5.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤2）中生物反应器的微载体类型为聚酯纤维纸片，使用前用灭菌PBS浸泡过夜。

6.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤2）中悬浮培养条件为：温度37～38℃，pH7.0～7.6，溶解氧30%～60%，接种量为3～6×10⁹个细胞。

7.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤2）中悬浮培养时根据细胞糖耗情况随时补糖或者补加细胞生长液，确保残糖不低于2g/L。

8.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的步骤3）中培养条件为：温度37～38℃，pH7.4～7.6，溶解氧30%～50%。

9.如权利要求1所述的应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，其特征在于所述的细胞生长液含90%Ham’s F12K或者DMEM、10%胎牛血清，其pH为7.0～7.6、溶解氧为30%～60%，含糖4.0g/L；所述的维持液含97%Ham’s F12K或者DMEM、3%胎牛血清，其pH为7.4～7.6、溶解氧为30%～50%，含糖4.0g/L。