[发明专利]人苍白杆菌活性填料及其制备方法

权利要求书

1.一种脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述人苍白杆菌活性填料附载有人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液，人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)SL1保藏编号为CGMCC No.7400；

所述填料为轻质多孔的聚氨酯泡沫块、颗粒活性炭、火山岩、珍珠岩中的一种或多种材料。

2.根据权利要求1所述脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述填料密度为0.7-1.0kg/m³,孔隙率为50-96%，粒径为5-50mm。

3.根据权利要求1所述脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述的微生物菌悬液与轻质多孔填料的质量比为50-300∶10。

4.根据权利要求1所述脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述的人苍白杆菌活性填料中人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)SL1菌体浓度大于10⁶CFU/g_{(活性填料)}。

5.根据权利要求1所述脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述填料为聚氨酯泡沫块。

6.根据权利要求1所述脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料，所述填料密度为0.9kg/m³,孔隙率为86%，粒径为30mm。

7.根据权利要求1所述的脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料制备方法，步骤如下：

(1)斜面培养：培养制备人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1CGMCC No.7400斜面菌种；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面培养基组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄2.0g，K₂HPO₄2.0g，KNO₃2.0g，NH₄Cl0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O0.01g，Na₂S₂O₃·5H₂O5.0g,琼脂20g，水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min；

(2)菌悬液的制备：将步骤(1)制备的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面菌体按5-20%接种量逐级发酵培养，分离获得菌体浓度为0.4-0.8g/L人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)SL1菌悬液；

人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液制备方法如下；

人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面菌体按5-20%接种量逐级发酵培养，培养温度36℃,培养时间48h，通风量5-200L/min，溶解氧>2.0mg/L,罐压0.03-0.10Mpa,发酵液置于冷冻离心机中于4℃，2000-8000rpm，离心浓缩5-20min，弃去上清液，沉淀用无菌营养液稀释，获得菌体浓度为0.4-0.8g/L人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1液体发酵培养基的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄2.0g，K₂HPO₄2.0g，KNO₃2.0g，NH₄Cl0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O0.01g，Na₂S₂O₃·5H₂O5.0g,水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1无菌营养液的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄3.0g，K₂HPO₄3.0g，NH₄H₂PO₄0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeCl₃0.01g，水1000ml，pH值6.8-7.2；121℃灭菌20min；

(3)人苍白杆菌活性填料的制备：

(a)将步骤(3)制备的微生物菌悬液喷淋到方块体或颗粒形状的轻质多孔材料的表面；(b)将带有人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1的多孔材料块（或颗粒）放入旋转混合器中旋转混合；(c)再次向轻质多孔材料表面喷淋微生物菌悬液，获得人苍白杆菌活性填料，4℃保存备用；

优选的重复步骤(a)-(c)2-3次，使材料表面以及微孔中均附载有菌细胞，获得人苍白杆菌活性填料。

8.根据权利要求7所述的脱除含硫恶臭物质的人苍白杆菌活性填料制备方法，

所述的人苍白杆菌活性填料制备步骤如下：

(1)斜面培养：制备人苍白杆菌(Ochrobactrum sp)SL1斜面菌种；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面培养基组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄2.0g，K₂HPO₄2.0g，KNO₃2.0g，NH₄Cl0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O0.01g，Na₂S₂O₃·5H₂O5.0g,琼脂20g，水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min；

(2)菌悬液的制备：人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面菌体10%接种量逐级发酵培养，分离获得菌体浓度为0.6g/L人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液；

人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液制备方法如下；

人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1斜面菌体按10%接种量逐级发酵培养，培养温度36℃培养时间48h，通风量100L/min，溶解氧>2.0mg/L,罐压0.06Mpa,发酵液置于冷冻离心机中于4℃，5000rpm，离心浓缩10min，弃去上清液，沉淀分别用无菌营养液稀释，分别获得菌体浓度为0.5g/L人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1液体发酵培养基的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄2.0g，K₂HPO₄2.0g，KNO₃2.0g，NH₄Cl0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O0.01g，Na₂S₂O₃·5H₂O5.0g,水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min；

所述的人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1无菌营养液的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄3.0g，K₂HPO₄3.0g，NH₄H₂PO₄0.5g，MgCl₂·6H₂O0.2g，FeCl₃0.01g，水1000ml，pH值6.8-7.2；121℃灭菌20min；

(3)微生物菌悬液的制备：人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1菌悬液中菌体总浓度为0.5g/L；

(4)人苍白杆菌活性填料的制备：(a)将步骤(3)制备的微生物菌悬液通过泵和喷淋头喷淋到方块体或颗粒形状的轻质多孔材料的表面；喷淋速度为10L/min，喷淋时间为60min；同时进行搅拌，搅拌速度为100rpm，搅拌时间为100min；使菌悬液与轻质多孔充分接触；(b)将带有人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）SL1细胞的多孔材料块放入旋转混合器中，于10rpm转速下旋转混合50min；随着混合器的转动，附着在轻质多孔材料表面的菌细胞由于离心力的作用进入到孔隙内部；(c)再次向轻质多孔材料表面喷淋微生物菌悬液，同时进行搅拌；获得人苍白杆菌活性填料，4℃保存备用；

优选的重复步骤(a)-(c)3次，使材料表面以及微孔中均附载有菌细胞，获得人苍白杆菌活性填料。