[发明专利]用于肿瘤病理诊断的探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤病理诊断的探针，其特征在于，包括金纳米簇及肿瘤特异性标志物的抗体，所述金纳米簇与所述肿瘤特异性标志物的抗体通过点击化学方式连接，其中，所述金纳米簇与所述肿瘤特异性标志物的抗体的摩尔比为1:1～1:100。

2.根据权利要求1所述的用于肿瘤病理诊断的探针，其特征在于，所述点击化学方式连接为所述金纳米簇表面修饰的叠氮基与所述肿瘤特异性标志物的抗体表面修饰的炔基发生点击化学反应而连接。

3.根据权利要求1所述的用于肿瘤病理诊断的探针，其特征在于，所述金纳米簇的粒径为0.5～2nm。

4.根据权利要求1所述的用于肿瘤病理诊断的探针，其特征在于，所述肿瘤特异性标志物的抗体为乳腺癌的抗HER2蛋白抗体、乳腺癌的抗P53蛋白抗体、乳腺癌的抗p185蛋白抗体、肺癌的CEA单克隆抗体或抗人肺癌单克隆抗体(McAb)N-35。

5.一种用于肿瘤病理诊断的探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将浓度为1～100mmol/L的氯金酸溶液与浓度为1～500mg/mL的牛血清白蛋白或人血清白蛋白溶液混合均匀，然后加入浓度为0.1～10mol/L的NaOH溶液，并于摇床中于0～100℃下温育3～100小时，得到金纳米簇，其中，所述NaOH与所述氯金酸的摩尔比为1:1～1:100；

将所述金纳米簇与经NHS预处理的叠氮化试剂按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合，得到表面修饰有叠氮基的金纳米簇；

将肿瘤特异性标志物的抗体与炔基化试剂按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合均匀并反应0.5小时，反应液经纯化处理后，得到表面修饰有炔基的肿瘤特异性标志物的抗体；

将所述表面修饰有叠氮基的金纳米簇与所述表面修饰有炔基的肿瘤特异性标志物的抗体按照摩尔比为1:1～1:100的比例混合均匀，并于37℃下孵育0.5小时，即得到所述用于肿瘤病理诊断的探针。

6.根据权利要求5所述的用于肿瘤病理诊断的探针的制备方法，其特征在于，所述叠氮化试剂为N₃-PEG₈-CH₂CH₂NH₂、6-TET Azide或6-HEX Azide；所述炔基化试剂为DBCO-sulfo-NHS Ester或DBCO-PEG₄-NHS ester。

7.根据权利要求5所述的用于肿瘤病理诊断的探针的制备方法，其特征在于，所述纯化处理的具体过程为：将反应液转入透析袋中，在室温下，于10～5000mL PBS缓冲液内透析1～300小时，每1～12小时换液一次，然后于10～5000mL双蒸馏水内透析1～12小时。

8.一种包含如权利要求1-4中任一项所述的用于肿瘤病理诊断的探针的试剂盒。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括封闭剂、显色剂、过氧化氢及核染剂。

10.根据权利要求9所述的用于肿瘤病理诊断的试剂盒，其特征在于，所述封闭剂为正常的山羊血清、牛血清白蛋白或牛奶粉；所述显色剂为二氨基联苯胺、邻苯二胺、四甲基联苯胺硫酸盐、5-氨基水杨酸、3-氨基-9-乙基咔唑或4-氯-1萘酚；所述核染剂为DAPI或Hoechst。