[发明专利]一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法

权利要求书

1.一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法，包括如下步骤：

（1）将经过消毒的胡萝卜花序置于直径为70～90mm的研钵中，加入B5液体培养基，用锤头直径为25～30mm的研锤挤压花蕾释放小孢子，得到悬浮液；

（2）用400目孔径的滤网过滤步骤（1）所得的悬浮液，收集滤液；

（3）对步骤（2）所得的滤液依次按照如下（a）-（c）的步骤进行梯度离心，获得小孢子：

（a）150～155g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；

（b）用所述B5液体培养基悬浮步骤（a）所得沉淀，125～130g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；

（c）用所述B5液体培养基悬浮步骤（b）所得沉淀，105～110g离心4～6min，弃上清，收集沉淀。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述胡萝卜花序为小孢子处于单核晚期的胡萝卜花序。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述胡萝卜花序与所述B5液体培养基的配比为15-20个所述胡萝卜花序：2mL所述B5液体培养基。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述400目孔径的滤网为双层滤网。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在步骤（2）所述用400目孔径的滤网过滤步骤（1）所得的悬浮液之后，还包括如下步骤：用所述B5液体培养基冲洗所述研钵以及过滤所述悬浮液后剩余滤渣，得到冲洗液，并用所述400目孔径的滤网对所述冲洗液进行过滤。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在步骤（1）所述挤压花蕾释放小孢子之后，还包括向所述研钵中加入所述B5液体培养基的步骤。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，步骤（3）之后还包括用NLN液体培养基悬浮步骤（c）所得沉淀，调整小孢子密度的步骤。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述胡萝卜花序是按照包括如下步骤的方法进行消毒的：将待消毒的胡萝卜花序置于体积百分含量为75%的乙醇水溶液中浸泡30±5s后，用体积百分含量为10%的次氯酸钠水溶液浸泡15±2min，再用无菌水浸泡冲洗，得到权利要求1步骤（1）中所述的经过消毒的胡萝卜花序。