[发明专利]一种海洋细菌新型酯酶及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201310129324.0 | 申请日： | 2013-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN103215238A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 吴月红;江夏薇;许学伟;魏笑莲;王春生;吴敏 | 申请（专利权）人： | 国家海洋局第二海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C12P7/62 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 徐飞虎;徐关寿 |
| 地址： | 310012 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海洋 细菌 新型 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种酯酶PE8蛋白，是具有如下（1）或（2）特征的蛋白质：
（1）、其氨基酸序列与Seq ID NO.2所示序列一致；
（2）、将Seq ID NO.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有酯酶PE8酶活性的由（1）衍生的突变体。
2.编码权利要求1所述的酯酶PE8蛋白的pe8基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行替换、添加和/或缺失一个或几个核苷酸从而获得编码能基本保留酯酶PE8蛋白生物学活性的pe8突变基因。
3.携带有权利要求2所述基因的载体。
4.一种宿主，其由权利要求3所述的载体经转化或转染原核生物或真核生物宿主得到。
5.一种利用权利要求1所述的酯酶PE8生产(R)‐3‐(4‐氟苯基)戊二酸单甲酯的方法，包括以下步骤：
（1）、利用酯酶PE8选择性水解3‐(4‐氟苯基)戊二酸二甲酯制备(R)‐3‐(4‐氟苯基)戊二酸单甲酯，其反应方程式为：
；
（2）、任选的从反应产物中分离出目标产物(R)‐3‐(4‐氟苯基)戊二酸 单甲酯。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的酯酶PE8在反应体系中的浓度范围为1‐100mg/ml。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的反应体系中3‐(4‐氟苯基)戊二酸二甲酯的浓度为10‐100mM。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的反应体系中所使用的有机溶剂为正己烷，异丙醚，甲苯，甲基叔丁基醚，异丙醇，丙酮，乙腈，甲醇，N,N‐二甲基甲酰胺，1,4‐二氧六环或二甲基亚砜其中的一种或其混合物。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（2）中的分离纯化方法包括萃取、减压干燥或其组合以分离出目标产物。
10.一种利用权利要求1所述的酯酶PE8生产(R)‐3‐(4‐氟苯基)戊二酸单甲酯的方法，包括以下步骤：
（1）、利用酯酶PE8选择性水解3‐(4‐氟苯基)戊二酸二甲酯，反应体系中含有10‐100mM3‐(4‐氟苯基)戊二酸二甲酯，1‐100mg/mlPE8粗酶粉，0‐30%(v/v)的有机溶剂；控制温度在20‐40℃，反应时间为10‐36h；
（2）、终止反应后，经萃取，减压干燥分离出目标产物(R)‐3‐(4‐氟苯基)戊二酸单甲酯。
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