[发明专利]一种β2-受体激动剂酶联免疫试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒，其特征在于：其组成成分及比例如下：

包括包被板、校准品、酶标记物工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液，浓缩提取液； 

所述包被板为孔底包被有抗沙丁胺醇多克隆抗体；包被量为5μg/mL，包被温度4℃过夜；

所述校准品为不同浓度的盐酸克伦特罗系列校准品；浓度为 0，0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb；

所述酶标记物工作液为含有标记辣根过氧化物酶的沙丁胺醇半抗原，为过碘酸钠法将辣根过氧化物酶同沙丁胺醇半抗原结合；酶标记物用酶稀释液稀释；

所述底物液A为重量百分比为0.07%的过氧化氢脲溶液；

所述底物液B为重量百分比为0.04% 的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液；

所述终止液为2M 硫酸；

所述的浓缩提取液为0.2mol/L PH为7.4的磷酸盐缓冲液；

所述的浓缩洗涤液为含质量浓度为1%的吐温20，0.2mol/l pH为7.4的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶标记物工作液为：用酶稀释液将标记辣根过氧化物酶的沙丁胺醇半抗原稀释，至沙丁胺醇半抗原：酶稀释液的体积比为1:1000；酶稀释液为含质量浓度为1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述底物液A使用0.1M的醋酸-柠檬酸缓冲液稀释；所述底物液B使用0.1M的醋酸-柠檬酸缓冲液将3,3',5,5'-四甲基联苯胺稀释至3,3',5,5'-四甲基联苯胺的质量浓度为0.04%。

4.根据权利要求1所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为20X浓缩洗涤液，使用前按照0.2M 磷酸盐吐温缓冲液：蒸馏水的体积比为1：19的比例稀释，混匀后使用；所述浓缩提取液20X浓缩提取液，使用前按照0.2M PBS 磷酸盐缓冲液：蒸馏水的体积比为1：19的比例稀释，混匀后使用。

5.根据权利要求1所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述包被板的包被步骤如下：

⑴抗体包被：用抗沙丁胺醇多克隆抗体最佳包被浓度包被酶标板，100uL/孔，4℃过夜，最佳包被量为5μg/mL，0.05M pH9.6 碳酸盐缓冲液作为稀释液用于包被固相载体；

⑵洗板：将孔内液体甩干，用洗涤液250μL/孔洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干；

⑶封闭：将由质量分数为1%的牛血清白蛋白和质量分数为10%的蔗糖的磷酸盐缓冲液组成的封闭液加入酶标板，200uL/孔，37℃温育2小时，将孔内液体甩干，拍干，真空干燥，加铝箔袋真空封装。

6.如权利要求1至5任一项权利要求所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒在快速定量检测β₂-受体激动剂残留量中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述β₂-受体激动剂来源于尿液、血清、肌肉组织、饲料或牛奶中。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述检测β₂-受体激动剂的最低检测限为0.1ng/mL。

9.一种如权利要求1至5任一项所述的β₂-受体激动剂酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤如下： 

⑴将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上，摇匀；

⑵取出微孔板，将不用的微孔板放入铝铂袋，保存于2-8℃；

⑶浓缩洗涤液在使用前回复到室温；

⑷编号：将样本和校准品对应微孔按序编号，每个样本和校准品做平行，并记录校准孔和样本孔所在的位置；

⑸加校准品/样本：加入校准品及样本各50μL到对应的微孔中，随即加入酶标记物工作液50μL/孔，振荡混匀，用封板膜封板后置25℃避光环境中反应30min；

⑹洗板：揭开封板膜，将孔内液体甩干，用浓缩洗涤液250μL/孔洗涤4~5次，每次间隔10s，拍干；

⑺显色：底物A液和底物B液按体积比1:1混匀，100μL/孔加入微孔板中，振荡混匀，用封板膜封板后，置25℃避光环境中反应15min；

⑻测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔OD值；

⑼结果：所获得的校准品和样品吸光度值的平均值除以第一个校准的吸光度值再乘以100，即可检测得出β₂-受体激动剂剂量。