[发明专利]用于合成醋酸格拉替雷的质谱内标的多肽

说明书

技术领域

本发明涉及用于合成醋酸格拉替雷（又称共聚物-1）的质谱内标的多肽，其制备方法和用途。具体而言，本发明涉及用于在醋酸格拉替雷合成过程中，作为中间体分子量测定的内标的多肽，其制备方法和用途。

背景技术

自身免疫类疾病是指，生物机体的免疫系统将一些机体本身的组织当作“外来物”进行攻击的现象。通常这种疾病可以通过阻碍生物机体T细胞和B细胞对机体自身组织的反应，得到缓解。这些早期的免疫反应是通过抗原结合到主要组织相容性抗原复合物（MHC）分子上促进的，并通过T细胞表达出来。自身免疫类疾病就是机体本身的组织和蛋白质被当作“自抗原”，被机体免疫系统攻击。例如：多发性硬化症，就是免疫系统攻击隔离和保护神经的髓鞘的疾病。这种疾病发展到失去髓鞘，就会带来神经元和运动神经功能丧失。

很多药物开发出来用于治疗自身免疫类疾病，包括多发性硬化症。醋酸格拉替雷是一个由丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸和酪氨酸组成的多肽的混合物。它的氨基酸摩尔比大约是0.392～0.462:0.129～0.153:0.300～0.374:0.086～0.100，平均分子量大约5000～9000道尔顿。US5800808中描述了共聚物-1和其三元共聚物（丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸和酪氨酸中任意三种组成的多肽的混合物）的平均分子量最佳范围和合成工艺。

最早，Teitelbaum等在Eur.J.Immun.,1,242,1971中描述了合成共聚物-1的方法是由溶于1,4-二氧六环的L-丙氨酸的N-羧酸酐、L-酪氨酸的N-羧酸酐、γ-谷氨酸苄酯的N-羧酸酐和三氟乙酰基赖氨酸的N-羧酸酐制备保护的醋酸格拉替雷（保护的共聚物-1）。然后用33%溴 化氢的乙酸溶液除去谷氨酸残基上的γ-苄基保护基，同时部分的切断多肽的肽链，得到三氟乙酰基醋酸格拉替雷（三氟乙酰基共聚物-1）。然后用哌啶水溶液除去赖氨酸残基上的三氟乙酰基保护基，得到粗共聚物-1。最后，经过透析，将溶液冻干，即得到共聚物-1原料药。

为了能够确保得到的共聚物-1或三元共聚物具有药效，就必须准确的知道多肽混合物在合成过程中的平均分子量分布和变化。已有常规方法可以得到共聚物-1的平均分子量，但是就整个工艺的过程控制而言，这类方法不适合。因为保护的共聚物和三氟乙酰基共聚物都不溶于水，而共聚物-1易溶于水，常规方法也是在水体系中测量共聚物-1的平均分子量。而且通常用于测定分子量的柱色谱法还会因待测产物的结构、组成等不同而存在一定误差。

因此，本领域中仍然需要更加准确地在共聚物-1合成过程中测量中间体的分子量，尤其是保护的共聚物和三氟乙酰基共聚物的分子量，正确得到共聚物-1合成过程中平均分子量和分子量分布变化的规律，从而加强对共聚物-1合成过程中的中间体质量控制。

发明内容

本发明就是为了在合成共聚物-1的过程中，加强工艺控制，找到保护的共聚物-1、三氟乙酰基共聚物-1和共聚物-1的分子量之间的关系和变化规律。所以，准确的测量保护的共聚物和三氟乙酰基共聚物的平均分子量和分子量分布就尤为重要了。本发明中利用了两个系列的合成多肽的作为内标，确定了色谱柱的校正系数，得到了比较准确的分子量，为找到保护的共聚物、三氟乙酰基共聚物和共聚物-1的分子量之间的关系和变化规律提供了可靠的数据支持。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于醋酸格拉替雷合成的内标品1，包括选自以下的3-7条多肽：

表1.内标肽系列（其中TFA表示三氟乙酰基，Bn表示苄基，NEt2表示碳端是N,N-二乙基酰胺）

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于醋酸格拉替雷合成的 内标品2，包括选自以下的3-7条多肽：

表2.内标肽系列二（其中TFA表示三氟乙酰基）

在一个实施方案中，所述内标肽全部由L-氨基酸组成。

在一个实施方案中，所述内标肽全部由D-氨基酸组成。

在一个实施方案中，本发明提供了所述内标品1用作在共聚物-1合成过程中测量保护的共聚物-1的平均分子量和分子量分布的内标的用途。

在一个实施方案中，本发明提供了所述内标品2用作在共聚物-1合成过程中测量三氟乙酰基共聚物-1的平均分子量和分子量分布的内标的用途。