[发明专利]手性（S）-β-羟基-γ-氨基酸修饰的发夹聚酰胺及其应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种手性（S）-β-羟基-γ-氨基酸修饰的发夹聚酰胺化合物，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。 

（二）背景技术

聚酰胺（polyamide）一般由2-3个不同的五元芳香杂环:N-甲基吡咯（Py）、N-甲基咪唑（Im）及3-羟基-Ｎ-甲基吡咯（Hp）组成；是能够在DNA小沟中，二个或发卡芳香氨基酸反平行、边靠边与预先确定的DNA碱基序列紧密地1:1特异性识别碱基的合成小分子化合物（图1），即Ｎ-甲基吡咯（Py）倾向于识别T，A和C碱基；N-甲基咪唑（Im）是G碱基的读取元素；而3-羟基-Ｎ-甲基吡咯（Hp）能特异地识别T。到目前为止，人们能够用Im/Py配对识别G·C碱基对；相反，一个Py/Im配对能与C·G键合；Hp/Py配对能把T·A从A·T、G·C和C·G区分开。并且，聚酰胺具有良好的细胞渗透性、能进入核中，不易被核酸酶水解，相对转录因子能较强的键合特定靶基因。研究证明:它能通过在启动子区和增强子上干涉转录系统，达到调控与疾病相关突变基因的表达。 

从上个世纪八十年代末美国加州理工学院Dervan研究组研究和开发这类聚酰胺化合物与DNA作用以来，一些研究组，尤其是Dervan研究组和日本京都大学Sugiyama研究组，正积极开展利用这类物质调控基因表达的研究，从而研发基因靶标治疗药物。它是目前最具潜力开发成以基因为靶标的治疗药物的合成小分子化合物之一。 

尽管人们利用聚酰胺（Polyamide）中不同芳香环残基的配对能将DNA中的四个Watson-Crick碱基对特异性的区分开；但是，由五元芳香环组成的长链聚酰胺存在刚性过强，曲率过大，不能很好地与DNA小沟曲率相匹配的不足；尤其是用Hp作为T碱基的识别元素尚存在一些缺点。最近，申请人成功研发利用（S）-β-羟基-γ-氨基酸残基（^Sγ_β-OH）与β-丙氨酸残基（β）配对^Sγ_β-OH/β能很好地将T·A从A·T、G·C和C·G区分开；而且，这样的氨基酸残基（^Sγ_β-OH）具有柔软性，起到‘弹簧’一样的作用，能够用于设计较长聚酰胺，使其有效识别人类基因中重复率较低的较长DNA序列，即解决使用较长聚酰胺识别较长DNA序列的专一性问题。 

因此，本发明将（S）-β-羟基-γ-氨基酸残基（^Sγ_β-OH）偶合到聚酰胺中，利用它的柔软性和对碱基T的特异识别性构建五个含（S）-β-羟基-γ-氨基酸手性识别单元的聚酰胺，构建了最长能识别12bp的DNA序列；并且，使用（S）-β-羟基-γ-氨基酸残基（^Sγ_β-OH）与β-丙氨酸残基（β）配对^Sγ_β-OH/β特异性识别碱基对T·A。 

另一方面，c-kit是一个编码为145～165kD的类型III受体酪氨酸激酶的膜键合糖蛋白，也称CD117，是个重要的原癌基因。它的配体是干细胞因子（Stem cell factor，SCF），也称成长因子、青灰因子、kit配体。c-kit正常表达在肥大细胞、黑素细胞、生殖细胞、皮内淋巴细胞、Cajal间质细胞及造血组细胞中。它和配体的作用在这些细胞的成长、分化、衰亡中起着重要的作用。除了这些正常的作用外，近年来的研究结果表明：c-kit基因的高表达、突变与肿瘤恶化的生物学行为及预后极为相关。其中包括：小细胞肺癌、黑素瘤、乳腺癌、成神经细胞瘤、胃肠道间质瘤（GISTs）、肥大细胞瘤及生殖细胞瘤；尤其，它过表达在小细胞肺癌、胃肠道间质瘤（GISTs）、和睾丸生殖细胞瘤中。 

有关造血组织中c-kit启动子的研究表明：c-Kit的表达在转录水平受到控制，但转录的调控是个复杂工程，它涉及几个活化子和抑制子，其中包括：启动子区的Sp1、Ap-2、类似Ets蛋白、c-Myb和GATA-1。不同元素在c-kit表达中所起的作用目前还不十分清楚。然而，一项研究证实Sp1在造血细胞和小细胞肺癌细胞中的c-Kit过表达起着至关重要的作用。 

目前有一种针对在慢性骨髓白血病（CML）中c-kit基因翻译产物蛋白的抑制剂，格列卫（甲磺酸伊马替尼，Gleevec/Glivec，imatinib mesylate），正在临床应用。现在也广泛用于治疗GIST。目前也有一些新的c-kit酶抑制剂正在开发和临床评估中。但，这些药物研究表明都产生不同程度的耐药突变性。