[发明专利]一种分子标记鉴定大豆细胞质雄性不育系种子纯度的方法

权利要求书

1. 一种分子标记鉴定大豆RN型细胞质雄性不育系种子纯度的方法，包括以下步骤： 

提取RN型细胞质雄性不育系种子的基因组DNA；以基因组DNA为模版，利用引物InDel-cms1进行PCR扩增，对扩增产物进行凝胶电泳分析；其中，扩增后的不育系片段长度为200bp，保持系扩增后的片段长度为212bp；通过片段长度差异可以将不育系和保持系准确区分，所有扩增片段与不育系扩增片段不同的均为伪不育系种子，检测得到的不育系特有长度片段个数占被检测所有种子的百分数即为RN型细胞质雄性不育系种子的纯度。

2. 权利要求1所述的分子标记鉴定大豆RN型细胞质雄性不育系种子纯度的方法，其特征在于引物序列为：

上游引物：5’-TGGACTGACGCTTATGCTGGCGTGG-3’

下游引物：5’-GATGACTGCTGGTGCTGAAGTCACT-3’。

3.权利要求1所述的分子标记鉴定大豆RN型细胞质雄性不育系种子纯度的方法，其特征在于大规模微量基因组DNA的提取方法如下：

取一粒不育系或保持系种子，在种脐背部切取直径为2.0mm，深1.5mm小块，放入1.5mL离心管加入液氮研磨成粉末，采用改进型SDS法提取基因组DNA，提取完成后置于-20℃冰箱保存备用；

PCR扩增反应： PCR反应体系为15μl，其中包括基因组DNA 30 ng，2×Taq Mix 7.5μl，引物0.2μmol·L^-1，其余部分用ddH₂O补齐；PCR反应程序：首先94℃ 4min；然后94℃ 30s，50℃ 30s，72℃ 30s，共32个循环；最后72℃ 5 min；

PCR扩增反应在基因扩增仪上进行；

凝胶电泳：扩增产物在浓度为3%的琼脂糖凝胶电泳上进行检测，100V电压电泳50min后，在凝胶成像仪上照相记录结果。