[发明专利]编码嵌合抗原受体蛋白的核酸及表达嵌合抗原受体蛋白的T淋巴细胞

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤细胞治疗领域，更具体地，涉及对表达EGFRvIII或高表达EGFR的上皮来源的肿瘤的转基因T淋巴细胞治疗领域。

背景技术

表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)是一种跨膜糖蛋白，分子量为170KD，是原癌基因C-erbB-1(HER-1)的表达产物，广泛分布于人体各组织的细胞膜上[Alan Wells.Molecules in focus EGF receptor.Int J Biochem Cell Biol，1999，31：637-643.]。其在大多数肿瘤中(如非小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌，乳腺癌、头颈部鳞癌、胶质细胞瘤、胰腺癌、食管癌、胃癌、前列腺癌等)过表达和(或)突变，与肿瘤的发生发展、恶性变、转移及预后密切相关[Jose B.Why the epidermal growth factorreceptor？The rational for cancer therapy[J].Oncologist，2002，7(4)：2-8.]。因此，EGFR是肿瘤治疗的一个重要靶点。另外，研究表明EGFR287-302表位仅在EGFRvIII或过表达EGFR的肿瘤中才暴露，而在正常组织中该表位隐匿[Gan HK，et.al.Targeting of aconformationally exposed，tumor-specific epitope of EGFR as a strategy for cancer therapy.Cancer Res，2012，72(12)：2924-2930.]。提示EGFR287-302表位是靶向EGFR的相关肿瘤治疗的一个理想位点。

针对EGFR287-302表位的抗体已经被开发，其显示良好的肿瘤特异性杀伤作用。但抗体治疗存在着抗体在体内血液循环中半衰期的限制，一般来说，半衰期大多在23天以内。因此，持续给药和/或增大给药剂量是肿瘤抗体治疗所要求的，这导致患者治疗成本的增加，以及某些情况下甚至不得已终结治疗。另外，治疗性抗体作为异源蛋白，还有可能在体内产生过敏反应及针对该治疗性抗体的中和性抗抗体的风险。

T淋巴细胞在肿瘤免疫应答中的作用日益受到重视。基于T淋巴细胞的过继性免疫治疗在部分肿瘤中取得了一定的效果，并且该种免疫治疗方法可以克服抗体治疗的上述缺陷，但在大多数肿瘤的疗效仍不能令人满意[Grupp SA，et.al.Adoptive cellular therapy.Curr Top Microbiol Immunol.2011，344：149-72.]。近年来，根据细胞毒性T淋巴细胞对靶细胞的识别特异性依赖于T细胞受体(T Cell Receptor，TCR)的发现，将针对肿瘤细胞相关抗原的抗体的scFv与T细胞受体的CD3ζ或FcεRIγ等胞内信号激活基序融合成嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)，并将其通过如慢病毒感染等方式基因修饰在T细胞表面。这种CAR T细胞能够以主要组织相容性复合物(Major HistocompatibilityComplex，MHC)非限制性方式选择性地将T淋巴细胞重新定向到肿瘤细胞并特异性地杀伤肿瘤。CAR T细胞是肿瘤免疫治疗领域的一个新的免疫治疗策略[Schmitz M，et.al.Chimeric antigen receptor-engineered T cells for iImmunotherapy of Cancer.J BiomedBiotechnol，2010，doi：10.1155/2010/956304.]。

嵌合抗原受体包括胞外结合区，跨膜区和胞内信号区。通常胞外区包含能够识别肿瘤相关抗原的scFv，跨膜区采用CD8，CD28等分子的跨膜区，胞内信号区采用免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM)如CD3ζ(即CD3zeta，简称Z)或FcεRIγ及共刺激信号分子CD28、CD137、CD134等的胞内信号区。