[发明专利]一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

包被有人源性CD74抗体的ELISA酶标板，所述的人源性CD74抗体为羊抗人CD74抗体C-16；

检测人源性可溶型CD74抗原的抗体，为小鼠抗人CD74抗体LN-2；

酶标二抗，HRP（辣根过氧化物酶）标记的马抗小鼠IgG；

标准蛋白，为重组人CD74蛋白，R&D公司。

2.根据权利要求1所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括：

样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗脱液、抗体稀释液、显色液，和终止液。

3.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的样品稀释液：样品为血清时，样品稀释液为1×PBS，pH:7.4；样品为细胞上清液时，样品稀释液为无血清培养基或1%FCS的培养基。

4.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的包被有人源性CD74抗体的ELISA酶标板，抗体的包被浓度为0.25μg/ml。

5.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的小鼠抗人CD74抗体LN-2的浓度为1μg/ml。

6.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的ELISA酶标板为丹麦NUNC公司的Maxisorp系列ELISA酶标板，96孔。

7.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭液为SuperBlock的封闭液。

8.根据权利要求1或2所述一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的包被缓冲液为1×PBS，pH:7.4；所述的ELISA酶标板洗脱液为含0.05%Tween-20的1×PBS溶液；所述的抗体稀释液为1×PBS，pH:7.4；所述的显色液为Thermo公司的TMB substrate kit；所述的终止液为2mol/L的硫酸溶液。

9.一种利用权利要求1-7任一所述的人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒定量检测人源性可溶型CD74蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

血清样本或细胞上清样本，用样品稀释液以1:10稀释，以100μl/孔的体积加样，室温孵育2小时；甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，甩干；将抗LN-2表位的人源性CD74抗体稀释成1μg/ml，每孔100μl，室温孵育2小时；甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，甩干；加入HRP标记的马抗小鼠IgG，每孔100μl，室温孵育1小时；甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，甩干；加入底物四甲基联苯胺H₂O₂，每孔100μl，室温避光孵育10-15分钟，加入2mol/L硫酸溶液终止反应，每孔50μl；在酶标仪上，450nm，测定OD值。