[发明专利]一种表达可溶性猪γ-干扰素PoIFN-γ的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种表达可溶性猪γ-干扰素PoIFN-γ的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是同时携带重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ和质粒pTf16-P_araB-tig的大肠杆菌BL21(DE3)。

2.如权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，所述重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ中的PoIFN-γ基因序列是SEQ ID NO.4；所述质粒pTf16-P_araB-tig可表达分子伴侣tig。

3.如权利要求2所述基因工程菌，其特征在于，所述PoIFN-γ基因(SEQ ID NO.4)的5′端为SEQ ID NO.2，3′端为SEQ ID NO.3，中间为猪γ-干扰素成熟肽基因(SEQ ID NO.1)。

4.如权利要求1或2所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，其步骤为：将所述重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ和质粒pTf16-P_araB-tig分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中，得到如权利要求1或2所述的基因工程菌。

5.如权利要求4所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ的构建方法为：首先人工合成所述PoIFN-γ基因(SEQ ID NO.4)，用KpnI/BamHI对所述PoIFN-γ基因(SEQ ID NO.4)和质粒pET-32a(+)进行双酶切，连接、转化大肠杆菌DH5α，再挑取重组子并提取所述重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ。

6.如权利要求5所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述重组质粒pET-32a(+)-PoIFN-γ经测序鉴定，证实其含有所述PoIFN-γ基因(SEQ ID NO.4)。

7.应用如权利要求1或2所述基因工程菌制备可溶性猪γ-干扰素PoIFN-γ的方法，其特征在于，其步骤为：将所述表达可溶性猪γ-干扰素PoIFN-γ的基因工程菌于LB液体培养基中进行培养后，转接入自诱导培养基继续培养，然后离心收集菌体；重悬所述菌体，搅拌过夜后，将其超声破碎并离心收集上清，经镍离子亲和层析并脱盐、浓缩得到纯化的猪γ-干扰素融合蛋白，将其酶解后再次经镍离子亲和层析并脱盐、浓缩，得到所述猪γ-干扰素PoIFN-γ。

8.如权利要求7所述方法，其特征在于，所述自两导培养基的配方为：甘油0.1-2％v/v、胰蛋白胨0.1-2％w/v，酵母提取物0.1-2％w/v，乳糖0.1-2％w/v，葡萄糖0.01-0.2％w/v，NaCl0.1-2％w/v，Na₂HPO₄5-100mM，KH₂PO₄5-100mM，(NH₄)₂SO₄5-100mM，MgSO₄1-20mM。

9.如权利要求7所述方法，其特征在于，所述菌体的重悬使用破菌缓冲液，其配方为：Tris10-100mM、溶菌酶0.01-0.2％w/v、TritonX-1000.1-1％v/v。

10.一种用于治疗猪病毒性疾病的组合物，其特征在于，所述组合物含有有效量的按权利要求7所制备的可溶性猪γ-干扰素PoIFN-γ，以及药学可接受成分。