[发明专利]玉米WRKY基因内含子长度多态性分子标记

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因工程技术和遗传育种领域，具体涉及到玉米WRKY基因内含子长度多态性分子标记。

背景技术

玉米（Zea maize）是重要的粮食作物，在国民经济中发挥着重要作用。根据玉米种质的不同遗传背景，可以把我国玉米划分为旅大红骨（丹340）、唐四平头（黄早四）、Lancaster（MO17）和Reid(B73)四个遗传类群，很多农业生产上推广使用的玉米杂交种都是由这四种不同类群种质杂交组配而来。玉米自交系黄早四、B73、Mo17、丹340分别属于唐四平头、Reid、Lancaster和旅大红骨类群，除具备各自代表类群的典型遗传特性，还具有高产、配合力高、抗病、对光周期不敏感等优异性状，是玉米遗传改良和育种过程中利用不同类群组配杂交种中的代表性骨干自交系，在玉米育种过程中应用最广泛。

WRKY是一类转录因子，在植物中具有多个家族成员。很多WRKY基因和抗病、抗盐、抗旱、抗低温、抗高温等多种逆境胁迫有关。基因内含子是两个毗邻的外显子的一段非编码序列，由于进化时受到的选择压力较小，所以在长期的栽培环境条件下不同自交系间存在长度或核苷酸序列的差异。基因外显子核苷酸编码氨基酸，在进化过程中为保证基因正确行使功能受到选择压力大，在进化时受到过程中相对保守，在不同自交系间核苷酸长度及序列的变化都很小。根据这种特性可以将两个毗邻的外显子之间的内含子序列开发为分子标记。内含子长度多态性标记ILP（Intron length Polymorphism,简称ILP）是将功能基因（如WRKY基因）序列开发而成的一种分子标记，目前虽然已经有些基因通过ILP进行了开发，并应用于构建遗传连锁图谱，但迄今为止WRKY-ILP标记的开发及应用尚无报道。本发明通过对玉米WRKY基因的两个毗邻的外显子区域的序列设计ILP特异引物，即WRKY-ILP分子标记。在四个玉米类群的代表性骨干自交系中经过特殊PCR体系和反应条件，通过PCR扩增得到长度有差异的片度，电泳凝胶显示为不同玉米自交系的WRKY-ILP分子标记。这将为玉米WRKY基因的高效转育并改良普通玉米栽培品种提供了分子辅助选择基础。

发明内容

本发明的目的是提供玉米WRKY基因内含子长度多态性分子标记。

根据本发明的玉米WRKY基因内含子长度多态性分子标记，包括：

ZmWRKY1-ILP-F1:5’-GACATCCCTTCGGACGAGTA-3’

ZmWRKY1-ILP-R1:5’-CCTCGTACGTCACCACCAG-3’；或

ZmWRKY2-ILP-F2:5’-GCAAGTACGGCCAGAAGC-3’

ZmWRKY2-ILP-R2:5’-ACGTGACGATCACCTTGTCC-3；或

ZmWRKY3-ILP-F3:5’-GTACCGCTGGAGGAAGTACG-3'

ZmWRKY3-ILP-R3:5’-CCCTCGTAGGTGGTGATGA-3’；或

ZmWRKY4-ILP-F4:5’-GACAGCTGACGCTGAGAGACT-3’

ZmWRKY4-ILP-R4:5’-GTAGGCGATGATCTCGGTGA-3’；或

ZmWRKY5-ILP-F5:5’-GCTGAGCCTCACCTGTCG-3’

ZmWRKY5-ILP-R5:5’-ACTCGTAGCCGTCGTCGTAG-3；或

ZmWRKY6-ILP-F6:5’-CCTCCACCACCACTTCCAT-3’

ZmWRKY6-ILP-R6:5’-CTTGTTGGCGATGATCGTG-3’；或

ZmWRKY7-ILP-F7:5’-AGAGGCGACCATGGAGGT-3’

ZmWRKY7-ILP-R7:5’-CATCCCTGGTCCTTGTGC-3’。

根据本发明的WRKY基因内含子长度多态性分子标记，其中，

基因ZmWRKY1(GRMZM2G071907)，位于玉米自交系B73Chr2的11,677,947到11,679,542，共1596bp；

基因ZmWRKY2(GRMZM2G040298)，位于玉米自交系B73Chr3199,190,076到199,191,712，共1637bp；

基因ZmWRKY3(GRMZM2G018721)，位于玉米自交系B73Chr7的1,923,404到1,925,109，共1706bp；