[发明专利]雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮及其应用

说明书

技术领域

    本发明涉及一种新的雄甾化合物，具体是雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮化合物及其作为免疫抑制药物的应用。

背景技术

思茅藤（Epigynum auritum）是夹竹桃科思茅藤族思茅藤属的一个种，产于云南南部。根据我们前期的研究结果，思茅藤中含有较多结构新颖的C₂₁甾体及其它化合物。在发现新药先导化合物的兴趣驱动下，我们对这些新化合物进行了大量的生物活性筛选实验，发现其中一个多烯高氧化度的雄甾化合物［雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮］在10-40 μg/mL的浓度下与现有免疫抑制活性物质雷公藤内酯和地塞米松活性相当。

免疫抑制是指对于免疫应答的抑制作用，免疫抑制可由天然或人为因素导致；天然免疫抑制包括天然免疫耐受，机体可能会对自身组织成分不产生免疫应答。人工免疫抑制在临床上通常用来抑制器官移植后出现的排异反应，治疗骨髓移植后出现的移植物抗宿主病，或治疗类风湿性关节炎、克隆氏症等自身免疫性疾病，一般会通过药物进行免疫抑制。自身免疫性疾病大多为慢性或进行性疾病需要长期用药，而现有的糖皮质激素（如地塞米松）和免疫抑制剂长期用药普遍存在毒副作用大、使用不方便等缺点。近年来，临床上对免疫抑制类药物的需求不断增加，因此，迫切需要研制一类高效低毒的新型免疫抑制剂，天然产物是免疫抑制剂的重要来源，雷公藤内酯醇就是从雷公藤中分离出来的含环氧的二萜内酯化合物，是雷公藤发挥免疫抑制及抗炎作用的主要成份之一。本发明提供的雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮化合物及其作为免疫抑制药物目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的雄甾化合物雄甾-4,6,8（9），13（14）-四烯-3,11,16-三酮，其结构式如下所示：

                                                 。

 

本发明雄甾-4,6,8（9），13（14）-四烯-3,11,16-三酮是从思茅藤植物中提取得到的，提取方法包括如下步骤：取思茅藤全株植物，用乙醇浸提3-4次，每次24h，过滤除渣后浓缩回收乙醇制得浸膏，将浸膏用水混悬后，先用石油醚萃取除去低极性成分，再用乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯萃取部分，用大孔吸附树脂D101进行粗分，分别用质量百分比浓度为20%、35%和60%的乙醇-水溶液进行洗脱，收集60%的乙醇-水洗脱液，浓缩后再用200-300目硅胶拌样，装柱进行柱层析，以石油醚-丙酮两相体系为流动相进行梯度洗脱，用薄层色谱法TLC检测，合并相同组分的洗脱液，对其中的含雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮的组分1分别进行硅胶和凝胶Sephadex LH-20的反复柱层析，洗脱纯化，得到雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮。

本发明的另一目的是将雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮应用在制备免疫抑制药物中。

本发明化合物雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮对ConA（伴刀豆蛋白）刺激的Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，与不加该化合物的对照组相比有显著性差异(p ＜0.01)，而且其免疫抑制活性与雷公藤内酯和地塞米松相当。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的内容并不局限于此，本实施例中方法如无特殊说明的均按常规方法操作，所用试剂如无特殊说明的采用常规市售试剂或按常规方法配置的试剂。

实施例1：化合物雄甾-4,6,8（9）,13（14）-四烯-3,11,16-三酮的制备