[发明专利]一种花药快速诱导胚性愈伤组织再生植株的方法

权利要求书

1.一种葡萄花药快速诱导胚性愈伤组织再生植株的方法，其特征在于：利用酿酒葡萄雷司令花药为材料，进行花药诱导胚性愈伤组织、愈伤组织分化培养、分化苗生根培养、炼苗移栽等步骤完成葡萄植株再生。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法按照以下步骤进行：

(1)花药采集和消毒处理：葡萄盛花前12-14天，即花粉四分体到单核期，在天气晴朗的上午摘取花药饱满的花蕾，4℃黑暗保存3天，然后对花蕾进行表面消毒。

(2)花药愈伤组织培育：从消过毒的花蕾中取出花药在无菌条件下接种到愈伤组织诱导培养基中。所述愈伤组织诱导培养基配方为：MS大量元素、MS微量元素、MS铁盐、0.5mg L^-1盐酸硫胺素、0.2mgL^-1盐酸吡哆醇、0.2mg L^-1烟酸、150mg L^-1肌醇、2.0mg L^-1P-CPA，0.20mg L^-1TDZ，5mg L^-1AgNO₃，10mgL^-1庆大霉素，100mg L^-1半胱氨酸，50mg L^-1水解酪蛋白、3％葡萄糖和0.28％脱乙酰吉兰糖胶，pH 6.2。

(3)愈伤组织分化培养：将胚性愈伤组织接种到组织分化培养基上进行分化诱导。所述组织分化培养基配方为：MS大量元素、MS微量、MS铁盐、0.5mgL^-1盐酸硫胺素、0.2mgL^-1盐酸吡哆醇、0.5mgL^-1烟酸、150mg L^-1肌醇、1.0mg L^-1P-CPA，0.20mg L^-1TDZ，0.5mg L^-1NOA，0.01mg L^-1GA₃、50mg L^-1水解酪蛋白、2.0mg L^-1甘氨酸、10g L^-1椰乳、5％蔗糖和0.28％脱乙酰吉兰糖胶，pH 6.2。培养条件为温度25℃，湿度70％，光照1000-1500lux，光照时间12小时/天。

(4)分化苗生根培养：将分化苗转入生根培养基诱导生根，所述生根培养基成分为1/2MS大量元素、MS微量元素、MS铁盐、0.1mg L^-1盐酸硫胺素、0.8mg L^-1盐酸吡哆醇、0.5mg L^-1烟酸、100mg L^-1肌醇、0.5mg L^-1α-萘乙酸钠、0.5mg L^-1NOA、50mg L^-1水解酪蛋白、2.0mg L^-1甘氨酸、3％葡萄糖和0.28％脱乙酰吉兰糖胶，pH 6.2。培养条件为先在光下培养一周，再暗培养一周，再在光下培养至正常生根，温度25℃，湿度70％，光照1500-2000lux，光照时间12小时/天。

(5)炼苗、假植、移栽：当苗基部长出3-4条根，根长3cm时打开瓶盖，环境温度25℃，湿度85％，光照强度2000lux，炼苗5天；然后取出组培苗，自来水洗净根部培养基，移栽到灭过菌的珍珠岩基质中，1/8MS营养液浇透后，每周浇灌一次培养液，加盖与营养钵相同大小的上端剪口的塑料袋保持适度，25℃室内培养1个月，后移栽到大田。